乙型肝炎病毒突變型表面抗原在桿狀病毒表達系統(tǒng)中的表達、純化及其免疫活性研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)是嚴重危害人類公共健康的世界性問題。在我國，HBV攜帶者約占人口總數(shù)的10％，現(xiàn)患慢性乙型肝炎約3000萬人。HBV的感染不僅能夠引起急、慢性病毒性肝炎，而且部分感染者會發(fā)生肝硬化和肝細胞癌。病毒的基因變異與逃避機體免疫應答、出現(xiàn)耐藥性、改變致病性和引起疾病流行等密切相關，研究病毒的基因變異對防治HBV感染有重要意義。乙型肝炎病毒S基因編碼的HBsAg是當前乙肝疫苗的主要成分，也

2、是HBV感染診斷的重要依據?？埂狧Bs抗體可用來預防肝移植后HBV的再感染和母嬰垂直感染，但這有賴于HBsAg與抗—HBs抗體之間的相互作用。當HBsAg抗原性發(fā)生改變可直接影響HBV感染后的診斷和治療。目前所知，S基因突變發(fā)生率最高的部位是表面抗原中第145位氨基酸(基因nt587G→A)的甘氨酸→精氨酸的突變(G145R)。這種新的變異株可導致疫苗免疫失敗、肝臟移植后HBV再感染和母嬰垂直傳播等，給乙肝防治帶來了新的問題?，F(xiàn)有HBs

3、Ag診斷試劑對G145R突變株感染病例的靈敏度不高，經常會有漏檢案例導致誤診和血源性HBV傳播。 本論文研究從一份獻血員血清中分離到一株G145R突變的HBV病毒X119，設計S區(qū)引物從中擴增出S基因，利用桿狀病毒表達系統(tǒng)進行變異型表面抗原(119s)的大規(guī)模表達。通過液相色譜和CsCl平衡梯度離心等手段對目的蛋白進行純化，獲得純化的119s經透射電鏡觀察證明其可自發(fā)組裝成病毒樣顆粒。為考察表達的重組抗原的免疫原性，本研究用純化

4、后的119s抗原免疫小鼠，結果經119s免疫的小鼠產生了針對119s強烈的特異性免疫應答，而陰性對照組則無特異抗體產生，證明顆粒性的119s蛋白具有良好的免疫原性，可見重組桿狀病毒表達系統(tǒng)表達生產的突變型sAg有望作為新乙肝疫苗的組成成分以提供對G145R突變株的保護。對純化蛋白的抗原性分析發(fā)現(xiàn)其與野生型sAg對構象型單抗反應性差異顯著，表明兩者在構象上有很大不同，導致其對部分現(xiàn)有檢測試劑的敏感度不高而易被漏檢，利用基因工程重組抗原作為