H102對Aβ致神經(jīng)毒性的保護(hù)作用的形態(tài)學(xué)、行為學(xué)及蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本課題依據(jù)AD病因的“Aβ級聯(lián)學(xué)說”，靶向AD的主要致病環(huán)節(jié)Aβ，開發(fā)出AD治療新藥H102。本研究旨在應(yīng)用Aβ1-42細(xì)胞損傷模型和APP轉(zhuǎn)基因動物模型，深入研究H102對AD的治療作用及可能的機(jī)制。 方法：1.H102對神經(jīng)細(xì)胞的營養(yǎng)和保護(hù)作用研究：(1)將不同濃度的H102作用于人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SY5Y，利用MTT法測定細(xì)胞的存活率，制定濃度-藥效曲線得出最佳藥物濃度；(2)將人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SY5Y細(xì)胞接種后分為對

2、照組、Aβ1-42損傷模型組及Aβ1-42損傷+H102保護(hù)組，觀察各組的MTT代謝率、LDH漏出率、細(xì)胞形態(tài)。2.H102對AD轉(zhuǎn)基因動物模型的作用研究：(1)將APP轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為模型組、H102低劑量注射組(60μmol/L)和H102高劑量注射組(120μmol/L)，并設(shè)同月齡同背景C57BL/6J為正常對照組。H102藥物注射組側(cè)腦室注射H102生理鹽水溶液，對照組和模型組側(cè)腦室注射等體積生理鹽水，3μl/d，共20天，

3、然后固定腦組織，剛果紅染色觀察腦內(nèi)β-淀粉樣斑塊；免疫組化測定Aβ、突觸素、PSD-95及Shankl表達(dá)；電鏡下觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元、突觸超微結(jié)構(gòu)；(2)APP轉(zhuǎn)基因小鼠側(cè)腦室注射H10280μmol/L3μl/d，20天后比較用藥前后小鼠水迷宮試驗(yàn)成績。 結(jié)果：1.H102在10～160μmol/L濃度范圍內(nèi)均可增加SY5Y細(xì)胞的存活率(P<0.01)，20μmol/L是增加細(xì)胞活性的最適濃度；與正常對照組相比，Aβ1-4

4、2損傷模型組MTT代謝率下降(P<0.05)、LDH漏出率增高(P<0.01)，細(xì)胞突起減少、死細(xì)胞增多，加入H102保護(hù)后可使上述指標(biāo)接近或恢復(fù)正常。2.(1)模型組皮層和海馬出現(xiàn)散在淀粉樣斑塊，Aβ表達(dá)增加，突觸素、PSD-95和Shankl表達(dá)減少；注射H102后淀粉樣斑塊數(shù)較模型組明顯減少，Aβ表達(dá)減少，突觸素，PSD-95和Shankl表達(dá)增多，接近正常對照組；電鏡下模型組神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)水腫，細(xì)胞器數(shù)量減少，線粒體大部分棘和膜融

5、合，模糊不清，部分線粒體空化，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象明顯，游離核糖體數(shù)目減少；突觸間隙融合、模糊不清，突觸小泡數(shù)量減少；線粒體空化。注射H102后神經(jīng)元和突觸上述病理表現(xiàn)減輕。(2)定位航行實(shí)驗(yàn)H102給藥后APP轉(zhuǎn)基因小鼠逃避潛伏期較給藥前顯著縮短(P<0.01)。 結(jié)論：1.H102可提高神經(jīng)細(xì)胞的存活率，減輕Aβ1-42所致的神經(jīng)元損傷，對神經(jīng)細(xì)胞有營養(yǎng)和保護(hù)作用。2.側(cè)腦室注射H102可以防止和逆轉(zhuǎn)APP轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)淀粉