bFGF對培養(yǎng)的人心肌成纖維細(xì)胞膠原合成的影響.pdf

1、目的 (1)建立體外培養(yǎng)人心肌成纖維細(xì)胞(hCFs)的方法，觀察體外培養(yǎng)的hCFs的生物學(xué)特性 (2)研究堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basic fibroblast growth factor bFGF)對hCFs膠原合成的影響 (3)探討 bFGF對人心肌成纖維細(xì)胞膠原合成的影響與心房顫動的相關(guān)機(jī)制。 方法： 用消化、差速貼壁法原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，2-3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)

2、，抗纖維連接蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。實(shí)驗(yàn)分為兩組： (1)對照組，未加任何誘導(dǎo)劑培養(yǎng)24小時(shí)。 (2)bFGF干預(yù)組，分別加入1ng/ml、5ng/ml、10ng/mlbFGF培養(yǎng)24小時(shí)。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測定Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果: (1)hCFs可在體外成功的培養(yǎng)傳代，體外可連續(xù)傳6-8代。顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)良好，細(xì)胞免疫熒光染色可見細(xì)胞漿波形蛋

3、白抗體、α-SMA抗體染色呈陽性，顯紅色，純度大于98％。VWF抗體染色陰性。臺盼藍(lán)排斥實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞存活率達(dá)90％以上。 (2)1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml濃度的bFGF均能促進(jìn)體外培養(yǎng)的hCFs的I型膠原RNA表達(dá)水平(P＜0.05)。 結(jié)論: 本研究觀察到bFGF能直接促進(jìn)體外培養(yǎng)的hCFsI型膠原mRNA表達(dá)水平的表達(dá)，作用的特點(diǎn)呈濃度依賴性。推斷bFGF是獨(dú)立于血流動力學(xué)之外的又一致心肌纖維化