苯甲酸雌二醇對體外培養(yǎng)的毛囊生長和對人皮膚成纖維細胞膠原合成的影響.pdf

1、研究背景：雌激素是主要由卵巢分泌的類固醇激素，它的主要作用是促進女性生殖器官的發(fā)育和第二性征的出現并維持其正常狀態(tài)，同時它也影響全身主要器官系統(tǒng)的功能。皮膚是雌激素發(fā)揮作用的最大非生殖器官。雌激素對各種不同靶器官的生物學活性是由配體的結構、雌激素受體(ER)亞型等狀況來決定。雌二醇是機體中主要發(fā)揮作用的雌激素，而苯甲酸雌二醇是臨床上進行激素替代治療(HRT)的主要藥物之一。 雌激素在皮膚中發(fā)揮重要的作用，主要表現在：(1)阻止皮

2、膚老化。絕經后女性皮膚發(fā)生深刻的變化：皮膚松弛和彈性下降、出現細小皺紋，同時皮膚干燥脫屑、修復功能減退、毛發(fā)數量減少等，組織學表現為：甘油聚糖濃度、水容量、膠原容量下降，這些變化可以通過局部和系統(tǒng)應用雌激素得到逆轉。(2)對皮膚損傷的修復作用。有人研究認為慢性損傷不易成功修復的原因是白細胞過度增多，膠原沉積下降。研究認為：局部應用雌激素可明顯逆轉老年病人損傷修復變慢的狀況。雌激素是一種損傷修復調節(jié)因子，在人類和動物模型中能逆轉年齡相關的

3、損傷愈合。(3)調節(jié)毛發(fā)生長：對女性AGA病人局部應用雌二醇苯甲酸酯、雌二醇戊酸酯、17α/β-雌二醇取得明顯的效果，它使毛發(fā)生長期延長、休止期縮短。(4)抑制皮脂腺分泌。 雌激素主要通過和雌激素受體(ER)相互作用調節(jié)信號傳導途徑發(fā)揮對靶器官的生物學作用。對人皮膚中ER分布的研究表明：ER在人皮膚中有廣泛的分布包括上皮組織的基底層及棘層的角質形成細胞、毛囊外根鞘的細胞核、上皮基質、毛乳頭、內毛根鞘細胞、皮脂腺及汗腺、真皮的纖維

4、母細胞核。毛囊和成纖維細胞是雌激素在皮膚中作用的主要靶點之一。 毛囊是一種有周期特性的皮膚附屬器官，經歷生長期、退行期和休止期。毛囊不同周期階段的轉換和循環(huán)再生是由毛囊角質形成細胞和毛乳頭成纖維細胞的雙向信號傳導來控制，許多生長刺激因子和抑制因子參與了毛囊發(fā)育的調節(jié)及周期性活動的控制。許多研究表明：雌激素對毛囊周期調節(jié)發(fā)揮重要影響。早在70年前，人們就發(fā)現毛發(fā)生長和性激素有密切關系：去掉卵巢的豚鼠剪毛后毛發(fā)再生速度明顯快于生育期

5、的母鼠。而局部應用雌二醇也表明大鼠、小鼠、和狗的毛發(fā)生長受到抑制。在臨床上也觀察到婦女懷孕期間毛發(fā)脫落速度變慢，而產后毛發(fā)大量脫落。 成纖維細胞是真皮中的主要細胞成分之一。它形成真皮中的膠原纖維、彈性纖維、基質等。真皮中膠原水平的下降是導致絕經后婦女皮膚老化外觀的主要原因之一。研究表明：應用雌二醇對鼠真皮成纖維細胞進行培養(yǎng)，發(fā)現膠原合成增加約76﹪。對鼠模型的研究發(fā)現：在光損傷皮膚和正常皮膚組織中，局部雌激素是重要的結締組織調節(jié)

6、因子，他能刺激新的結締組織帶的形成[12]。有人研究了年齡的老化和絕經兩種因素對皮膚膠原的影響，結果表明，相對于年齡的老化，絕經對膠原的影響更為顯著，表明了激素對膠原合成和表達有非常重要的意義。 本課題的研究主要包括以下兩個方面：(一)苯甲酸雌二醇對體外培養(yǎng)的毛囊生長的影響目的：通過對豬毛囊和人毛囊進行體外培養(yǎng)，來觀察苯甲酸雌二醇對毛囊生長的影響。方法：本實驗分別采用人毛囊和豬毛囊進行體外培養(yǎng)。實驗分五組：空白對照組、和4個苯甲

7、酸雌二醇濃度組(10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L)。每組12個毛囊。0、2、4、6、8天通過顯微鏡測量毛囊生長長度、觀察其形態(tài)變化。結果：與陰性對照組比較，苯甲酸雌二醇濃度為1μmol/L(人)/10μmol/L(豬)毛囊生長受到抑制，培養(yǎng)8天后，毛乳頭結構呈現退行性改變。結論：苯甲酸雌二醇對毛囊生長有明顯的抑制作用。 (二)苯甲酸雌二醇及UVA輻照對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞的增殖和膠原合

8、成的影響。 目的：研究苯甲酸雌二醇對體外培養(yǎng)的人成纖維細胞增殖、膠原合成及其對UVA抑制膠原合成的影響。方法：此實驗由兩部分組成。實驗一：用MTT法檢測苯甲酸雌二醇對體外培養(yǎng)的成纖維細胞增殖情況，并應用不同劑量苯甲酸雌二醇(2nmol/L,4nmol/L，8nmol/L，16nmol/L)對細胞進行培養(yǎng)，并于培養(yǎng)結束時收集細胞提取細胞mRNA測Ⅰ型和Ⅲ型前膠原的表達水平。實驗二：應用UVA(10J/cm2)和苯甲酸雌二醇對細胞進

9、行處理。實驗分為三組：空白對照組、紫外線組(10J/cm2)、紫外線和苯甲酸雌二醇共同處理組(4nmol/L+10J/cm2和16nmol/L+10J/cm2)。處理結束后測定兩型前膠原Ⅰ型和Ⅲ型的表達水平。結果：苯甲酸雌二醇對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞增殖無促進作用。RT-PCR結果表明：苯甲酸雌二醇對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞兩型前膠原合成有促進作用，且隨著藥物濃度的增高，兩型前膠原的表達水平有增高趨勢(p＜0.05)。紫外線組兩型