蘆薈多糖對(duì)體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成與分泌影響.pdf

1、目的：觀察蘆薈多糖對(duì)體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成與分泌的影響，并探討其在創(chuàng)面愈合過程中可能的作用機(jī)制。 方法： 1、體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞隨機(jī)分為蘆薈多糖組(25，50，100，200，400mg/L)和對(duì)照組。倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)并拍照記錄；通過MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖狀況，并繪制生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；通過AO-EB染色法檢測(cè)成纖維細(xì)胞是否發(fā)生凋亡或死亡，以此反映蘆薈多 糖對(duì)人成纖維細(xì)

2、胞是否有毒副作用；通過LDH漏出率檢測(cè)反映細(xì)胞損傷程度。 2、采用[3H]-脯氨酸摻入法檢測(cè)各組成纖維細(xì)胞DNA合成狀況；采用RT-PCR法檢測(cè)人成纖維細(xì)胞中Ⅰ型、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)情況；采用熒光免疫細(xì)胞化學(xué)染色法來檢測(cè)體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)情況。 3、ELISA法測(cè)定體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞分泌Ⅰ、Ⅲ型膠原、透明質(zhì)酸、羥脯氨酸的水平。 結(jié)果： 1、倒置相差顯微鏡觀察到，各組人成纖維細(xì)

3、胞形態(tài)基本相似；MTT檢測(cè)蘆薈多糖組細(xì)胞增殖活躍，較對(duì)照組有較高的增值。實(shí)驗(yàn)組G0/G1期細(xì)胞所占百分率顯著下降，而G2/M期和S期細(xì)胞所占百分率顯著上升(P<0.01)；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)各組染色結(jié)果顯示核染色質(zhì)著綠色并呈正常結(jié)構(gòu)，為正?；罴?xì)胞，未發(fā)生凋亡和死亡；實(shí)驗(yàn)各組的LDH漏出率均呈不同程度地下降(P<0.05)。 2、與對(duì)照組比較，蘆薈多糖作用人成纖維細(xì)胞后，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膠原DNA合成、Ⅰ型、Ⅲ型膠原mRNA和細(xì)胞內(nèi)膠原