濕熱挾瘀證慢性非細菌性前列腺炎特征性炎癥因子篩選及清熱利濕化瘀方的調節(jié)作用研究.pdf

1、研究目的：
　　 1）探討慢性非細菌性前列腺炎的中醫(yī)基本證型、病機特點及演變規(guī)律；
　　 2）篩選基本證型的慢性非細菌性前列腺炎特征性炎癥因子；
　　 3）探討特征性炎癥因子在慢性非細菌性前列腺炎發(fā)病機制中的作用；
　　 4）探討根據(jù)慢性非細菌性前列腺炎基本病機擬方的中藥復方抑制炎癥反應的分子機制。
　　 研究方法：
　　 1）隨機調查湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中醫(yī)外科門診的慢性前列腺炎患

2、者1083 例，填寫《慢性前列腺炎中醫(yī)證型分布調查表》
　　 并對結果進行統(tǒng)計分析，了解慢性前列腺炎的中醫(yī)證型分布、兼證特點，中醫(yī)證候與西醫(yī)診斷分型、病程、年齡的關系，中醫(yī)證型的主要癥狀、體征特點以及慢性非細菌性前列腺炎的中醫(yī)基本證型。
　　 2）選取基本證型的慢性非細菌性前列腺炎患者38例，健康對照組21例，收集前列腺液，提取總蛋白，采用抗體芯片技術檢測前列腺液中40 種主要炎癥因子的表達，比對分析后初篩出差異表達蛋白

3、點。
　　 3）采用Western-blot方法驗證初篩出差異表達蛋白，了解慢性非細菌性前列腺炎患者炎癥因子網(wǎng)絡的調控特點，明確慢性非細菌性前列腺炎的特征性炎癥因子。
　　 4）應用大鼠前列腺蛋白提純液輔以免疫佐劑制備實驗性慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型，并給予中藥復方灌胃，中藥復方根據(jù)慢性非細菌性前列腺炎基本病機擬方，消炎痛為西藥對照，采用HE 染色、免疫組織化學、熒光定量RT-PCR 等方法檢測中藥復方對模型大鼠前列腺

4、組織的病理結構影響，以及篩選出的特征性炎癥因子mRNA 及蛋白表達的影響，探討中藥復方通過抑制炎癥反應發(fā)揮治療效果的分子機制。
　　 研究結果：
　　 1）1083例慢性前列腺炎患者中醫(yī)證型分布調查結果顯示，出現(xiàn)濕熱蘊阻、氣滯血瘀兩證的比例高達91.51％與84.30％以上。但出現(xiàn)單一兩證的比例則比較小，只有3.88％與2.22％，臨床大多表現(xiàn)為兼夾證。在所有兼夾證中，以濕熱蘊阻+氣滯血瘀證最高，達56.79％，其次為濕

5、熱蘊阻+氣滯血瘀+腎陽不足，為14.59％，這兩類證占所有證型的70％以上。單一證如濕熱蘊阻證多出現(xiàn)在<6 個月的患者中，病程>6 個月以上的患者出現(xiàn)單一證的比例極少，而且隨病程延長，出現(xiàn)腎虛的比例也相應增多。在年齡結構分布中，30歲以下出現(xiàn)腎虛的兼證少，30歲以上者出現(xiàn)腎虛兼證的多。尿頻、會陰部等局部墜脹或疼痛、尿后滴瀝是慢性前列腺炎特征性證候。慢性前列腺炎患者以CAP/CPPS（Ⅲ型）為多，占總數(shù)的91.23％，以濕熱蘊阻證+氣滯血

6、瘀證為主，其次為濕熱蘊阻證+氣滯血瘀證+腎陽不足證；濕熱挾瘀證是慢性非細菌性前列腺炎的中醫(yī)基本證型。
　　 2）濕熱挾瘀證慢性非細菌性前列腺炎患者前列腺液抗體芯片檢測結果為：表達增強>1.5 倍的細胞因子有白介素1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-11（IL-11）、可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅱ（sTNF RⅡ）、血小板衍生生長因子-BB （PDGF-BB）、單核細胞趨化因子1(MCP-1)、單核細胞趨化因子2（MC

7、P-2）七種炎癥因子；聚類分析結果顯示，PDGF-BB、MCP-1最后聚合為一類，IL-1β、IL-11、IL-6、MCP-2、s TNF RⅡ為一類，其他炎癥因子為一類，差異有統(tǒng)計性意義（P<0.01）。IL-1β、IL-6、MCP-1、MCP-2、PDGF-BB 為促炎癥因子，IL-11、s TNF RⅡ為抗炎癥因子。促炎癥因子的表達明顯高于抗炎癥因子表達。
　　 3）經(jīng)Western blot 驗證， IL-1β、IL-6

8、、MCP-1、PDGF-BB、sTNF RⅡ五種細胞因子在慢性非細菌性前列腺炎患者中表達增高，其中MCP-1、PDGF-BB、sTNF RⅡ三種細胞因子為未報道過新發(fā)現(xiàn)的細胞因子。TNF-α、IL-1β、IL-6 是慢性非細菌性前列腺炎發(fā)病機制中的直接引起炎癥反應的細胞因子，MCP-1 的趨化作用進一步加重了炎癥反應過程，炎癥反應的刺激導致吞噬細胞或組織細胞大量分泌PDGF-BB 促進腺上皮細胞增殖，進一步導致病情的加重。保護性抗炎癥因

9、子sTNF RⅡ的增高可抑制TNF-α的生物學效應。
　　 4）清熱利濕化瘀方（三草安前湯）可顯著降低慢性非細菌性前列腺炎模型大鼠炎癥因子IL-1β、IL-6、炎癥趨化因子MCP-1、炎癥相關生長因子PDGF-BB 的mRNA 及蛋白表達水平（P<0.01），且大、中劑量組作用要優(yōu)于小劑量組（P<0.05）；對照組消炎痛對IL-1β、IL-6 的mRNA 及蛋白表達水平改善明顯，但對炎癥趨化因子MCP-1、炎癥相關生長因子PDG

10、F-BB 的mRNA 及蛋白表達水平效果要遠低于三草安前湯（P<0.01）；可通過TNF-TNFR-sTNFR體系反饋調節(jié)間接起到降低TNFRⅡ、sTNF RⅡ表達的作用。
　　 研究結論：
　　 1）濕熱、瘀血是導致慢性前列腺炎的主要發(fā)病因素；腎虛在慢性前列腺炎發(fā)病中多由久病傷腎所致，是病情進展遷延的結果，可進一步導致疾病纏綿難愈。
　　 2）慢性非細菌性前列腺炎的基本病機為濕熱挾瘀，濕熱挾瘀證是其最多見臨床基

11、本證型。
　　 3）IL-1β、IL-6、MCP-1、PDGF-BB、sTNF RⅡ為濕熱挾瘀證慢性非細菌性前列腺炎的五種特征性炎癥因子。慢性非細菌性前列腺炎處于以促炎因子占優(yōu)勢的免疫炎癥反應“弱平衡”狀態(tài)中。
　　 4）清熱利濕化瘀是治療慢性非細菌性前列腺炎的基本大法，據(jù)此擬方的三草安前湯通過直接調控TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、PDGF-BB 以及間接調控TNFR、sTNFR，從而抑制炎癥反應，阻止前