低氧高二氧化碳大鼠肝臟HO-1表達(dá)及紅花注射液干預(yù)作用.pdf

1、目的： 研究慢性低氧高二氧化碳大鼠肝臟脂質(zhì)過氧化水平變化和血紅素氧合酶-1(HO-1)在肝組織中的基因表達(dá)及蛋白分布情況的變化，探討低氧高二氧化碳對(duì)肝臟的影響及HO-1在慢性低氧高二氧化碳時(shí)對(duì)肝組織可能起的作用和意義；同時(shí)研究紅花注射液預(yù)處理對(duì)低氧高二氧化碳大鼠肝組織可能的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法： 二級(jí)雄性成年(Sprague-Dawley)SD大鼠30，只，體重180-220g，隨機(jī)分為三組，正常對(duì)照組(N組)

2、，慢性低O2高CO2四周組(F組)，慢性低O2高CO2四周+紅花注射液用藥組(H組)，每組各10只(n=10)。正常對(duì)照組大鼠置于室內(nèi)飼養(yǎng)。慢性低O2高CO2四周組和慢性低O2高CO2四周+紅花注射液用藥組置于常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi)。常壓低氧高二氧化碳艙，實(shí)驗(yàn)期間充入N2使O2濃度維持在9.0％-11.0％，CO2濃度維持在5.0％-6.5％。艙內(nèi)置無水CaCL2吸收水蒸氣。每天艙內(nèi)飼養(yǎng)8小時(shí)，每周6天，連續(xù)4周。慢性低O2高CO2四周

3、+紅花注射液用藥組，每次進(jìn)入低氧高二氧化碳艙前予紅花注射液(2ml.kg-1.d-1)腹腔注射，其它條件同慢性低O2高CO2四周組。正常對(duì)照組和慢性低O2高CO2四周組進(jìn)艙前用0.9％生理鹽水(2ml·kg-1·d-1)腹腔注射做對(duì)照。造模滿4周后，戊巴比妥鈉(35mg/kg，i.p.)麻醉，按相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)要求留取實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，用黃嘌呤氧化酶法(羥胺法)檢測(cè)各組動(dòng)物肝組織內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法檢測(cè)丙二醛(MDA)含量變

4、化；免疫組織化學(xué)法觀察HO-1蛋白在肝細(xì)胞內(nèi)的生成與分布，蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察低氧高二氧化碳大鼠及紅花注射液干預(yù)后肝組織的形態(tài)學(xué)改變。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肝組織HO-1mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果： (1)黃嘌呤氧化酶法(羥胺法)檢測(cè)結(jié)果：SOD活性慢性低O2高CO2四周組(F組)較正常對(duì)照組(N組)明顯下降，差別具有顯著性意義(P＜0.01)，而慢性低O2高CO2四周+紅花注射液組(H組)較

5、慢性低O2高CO2四周組(F組)又回升，差別具有顯著性意義(P＜0.01)。 (2)硫代巴比妥酸法檢測(cè)結(jié)果：MDA含量慢性低O2高CO2四周組(F組)較正常對(duì)照組(N組)明顯升高，差別具有顯著性意義(P＜0.01)，而慢性低O2高CO2四周+紅花注射液組(H組)較慢性低O2高CO2四周組(F組)又下降，差別具有顯著性意義(P＜0.01)。 (3)HE染色結(jié)果：正常對(duì)照組(N組)肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞核圓形，細(xì)胞排列整齊，

6、慢性低O2高CO2四周組(F組)大鼠肝細(xì)胞索排列紊亂，細(xì)胞出現(xiàn)混濁腫脹，大量肝細(xì)胞脂肪變性。慢性低O2高CO2四周+紅花注射液組(H組)肝細(xì)胞上述變化明顯改善，基本無氣球樣變，可見少量肝細(xì)胞嗜酸變性。 (4)免疫組織化學(xué)法結(jié)果：HO-1陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在肝細(xì)胞胞漿內(nèi)。正常對(duì)照組(N組)肝組織內(nèi)有極少量散在分布的HO-1陽(yáng)性細(xì)胞。慢性低O2高CO2四周組(F組)肝組織內(nèi)出現(xiàn)較正常對(duì)照組(N組)明顯增多的呈散在分布的陽(yáng)性細(xì)胞。慢性低

7、O2高CO2四周+紅花注射液組(H組)陽(yáng)性細(xì)胞較F組又明顯減少。 (5)RT-PCR結(jié)果：慢性低O2高CO2四周組(F組)肝組織HO-1mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(N組)(P＜0.01)，慢性低O2高CO2四周+紅花注射液組(H組)肝組織HO-1mRNA表達(dá)低于慢性低O2高CO2四周組(F組)(P＜0.01)。 結(jié)論： 慢性低氧高二氧化碳大鼠肝組織內(nèi)SOD活性下降，而MDA含量增加，表明低氧高二碳可使肝組織氧