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1、目的:從組織水平和細胞水平觀察bcl-2在銀屑病患者皮損和正常人皮膚中的表達以及黃芪注射液對其表達的影響,研究黃芪注射液治療銀屑病的機理,為臨床應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)。 方法: 1.免疫組織化學(xué)法檢測尋常型銀屑病患者皮損30例,正常人皮膚28例中bcl-2表達情況。 2.MTT法測定黃芪注射液干預(yù)后角質(zhì)形成細胞生長情況。 3.流式細胞術(shù)檢測黃芪注射液干預(yù)后角質(zhì)形成細胞各期細胞比例變化情況。 4.免
2、疫細胞化學(xué)法檢測黃芪注射液干預(yù)后角質(zhì)形成細胞中bcl-2表達情況。 結(jié)果: 1.bcl-2的陽性反應(yīng)定位于細胞漿。正常人表皮基底層細胞bcl-2呈陽性表達,銀屑病患者皮損中表達明顯降低或呈陰性表達。經(jīng)t檢驗P<0.05,差別有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.成功培養(yǎng)了正常人皮膚和銀屑病患者皮損角質(zhì)形成細胞,經(jīng)免疫細胞化學(xué)證實。 3.MTT結(jié)果示:與0μg/ml濃度組相比, 100μg/ml濃度組(低濃度)、1000μg
3、/ml濃度組(中濃度)、10000μg/ml濃度組(高濃度)對其生長均有較明顯的抑制作用。 4.流式細胞術(shù)結(jié)果示:隨著加入黃芪濃度的增加, G1期細胞比例明顯增加,S期和G2期細胞比例降低,細胞發(fā)生G1期阻滯,提示黃芪注射液可以抑制細胞的增殖。 5.免疫細胞化學(xué)結(jié)果示:(1)銀屑病皮損培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞與正常人皮膚培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞相比,bcl-2表達下降,兩組之間bcl-2的表達有顯著性差異(P<0.05)。(2)隨著
4、黃芪濃度的增加,bcl-2表達升高,各濃度組之間bcl-2的表達有顯著性差異(P<0.05)。(3)濃度和分組之間存在交互作用(P<0.05),說明不同濃度的黃芪對銀屑病組和正常人組培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞的影響不同。進一步分析顯示:正常人皮膚培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞中,加入不同濃度黃芪后,bcl-2表達差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。銀屑病皮損培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞中,隨著黃芪濃度的增加,bcl-2表達升高,四組之間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)
5、。四個濃度組之間進行兩兩比較結(jié)果:0μg/ml組與低、中、高濃度組之間均有顯著性差異。低濃度組與中、高濃度組之間亦有顯著性差異。中濃度組與高濃度組之間無顯著性差異。 結(jié)論: 1.bcl-2在正常人皮膚組織基底細胞層呈陽性表達,在銀屑病皮損中表達明顯降低。銀屑病皮損凋亡增加可能與bcl-2減少有關(guān)。 2.黃芪可以抑制角質(zhì)形成細胞的生長。 3.黃芪可能通過增加bcl-2的表達,抑制細胞凋亡,使銀屑病患者表皮增
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