PI3K信號轉導途徑對哮喘患者外周血Th1-Th2失衡影響的臨床研究.pdf

1、目的：初步了解磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)在急性發(fā)作期哮喘患者外周血單個核細胞(PBMC)中的活化情況，并觀察其特異性抑制劑Wortmannin(渥曼青霉素)對Th1、Th2型細胞因子IFN-γ和IL-4表達的影響，初步探討PI3K信號轉導途徑在哮喘患者T細胞免疫紊亂中，參與Th1/Th2失衡的作用機制。 方法：以20例急性發(fā)作期哮喘患者(男性12例，女性8例，平均年齡：30±

2、9.6歲)作為實驗組，15例健康人(男性9例，女性6例，平均年齡28±8.9歲)為對照組。哮喘患者進入本實驗前未經過激素治療；健康者經自愿體檢，近期無感染及過敏性疾病史。每一研究對象于清晨空腹時，無菌肝素抗凝抽取靜脈血5ml(哮喘患者于使用激素前)，Ficoll密度梯度離心法提取獲得PBMC。半定量RT-PER法測定PBMC中PI3KmRNA的表達，ELISA法測定未經Wortmannin干預及不同濃度組Wortmannin處理的PBM

3、C培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-4水平。 結果：(1)電泳結果顯示：實驗中所有擴增產物都出現了內參β-actin基因的253bp擴增帶和PI3K基因的500bp擴增帶，哮喘組PI3K基因擴增帶亮度明顯強于對照組。半定量結果分析顯示：正常對照組PBMC中PI3KmRNA的表達較低(0.521±0.133)，急性發(fā)作期哮喘患者PBMC中P13KmRNA的表達(0.649±0.143)則高于正常對照組，表達差異顯著有統計學意義(P<0

4、.05)。(2)上清液中IFN-γ、IL-4檢測：哮喘患者PBMC培養(yǎng)上清液中IFN-γ水平低下、IL-4水平升高，與對照組比較差異均有顯著性(P<0.01和P<0.01)；同時加入不同濃度Wortmannin共培養(yǎng)后，實驗發(fā)現均濃度依賴性地抑制了哮喘組及對照組IL-4的產生(P<0.05或P<0.01)，而同組不同濃度梯度組間比較IFN-γ產生差異無顯著性(P>0.05)。 結論： (1)急性發(fā)作期哮喘患者PBMC PI3Km

5、RNA表達明顯增高，提示PI3K信號轉導途徑活化參與了哮喘的免疫學發(fā)病機制。(2)Wortmannin能濃度依賴性地抑制由CD3mAb誘導的哮喘組和對照組PBMC培養(yǎng)上清液中IL-4的產生，而對IFN-γ產生無明顯影響。說明Wortmannin對Th1型細胞因子的產生無抑制作用，而對Th2型細胞因子的產生有抑制作用。由此推論：PI3K過度活化對Th1型細胞因子IFN-γ影響不明顯，有可能主要是介導Th2型細胞因子IL-4的產生而參與Th