M受體亞型、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮抑素在人前列腺組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景與目的： 良性前列腺增生(BPH)是我國(guó)男性發(fā)病率最高的良性腫瘤，60歲以上老年人有50﹪發(fā)生良性前列腺增生癥也是最常見的老年病致死原因，前列腺癌(PCa)一直是西方國(guó)家男性最常見的惡性腫瘤。在我國(guó)盡管前列腺癌的發(fā)病率相對(duì)較低，但近幾年也有逐年上升的趨勢(shì)。對(duì)前列腺癌進(jìn)行早期發(fā)現(xiàn)和有效的治療已使總體死亡率有了明顯的降低。然而，晚期前列腺癌的治療仍然是一個(gè)難題。慢性前列腺炎由于其不適癥狀重、治療效果不滿意，影響著患者的正常生

2、活，因而也一直困擾著國(guó)內(nèi)外泌尿外科醫(yī)生。前列腺疾病的危害如此之大足以引起我們的重視，然而前列腺這些疾病的發(fā)病機(jī)理很多還不清楚，治療效果還很不滿意，還需要進(jìn)一步深入研究。 前列腺的生長(zhǎng)與功能受多種神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，包括膽堿能神經(jīng)與去甲腎上腺素能神經(jīng)，近年來(lái)對(duì)前列腺的組織結(jié)構(gòu)與功能的研究已經(jīng)越來(lái)越深入和廣泛，特別是對(duì)調(diào)節(jié)前列腺功能的植物神經(jīng)系統(tǒng)的研究顯示前列腺疾病發(fā)生、發(fā)展與神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)關(guān)系密切。在良性前列腺增生癥的治療上α受體阻滯

3、劑已經(jīng)取得了巨大的成功，雄激素阻斷也已經(jīng)成功地用于前列腺癌的內(nèi)分泌治療。然而對(duì)于膽堿能M受體在前列腺生理功能與疾病發(fā)生發(fā)展中的作用還不是很清楚，也還沒(méi)有這方面的藥物應(yīng)用于前列腺疾病的治療。 研究表明在許多腫瘤細(xì)胞都有膽堿能受體表達(dá)，并且表達(dá)強(qiáng)度高于正常。對(duì)乳腺癌及其他腫瘤細(xì)胞系的研究發(fā)現(xiàn)，M<,3>受體與腫瘤的發(fā)生、分級(jí)密切相關(guān)，膽堿能受體的活動(dòng)通過(guò)不同的信號(hào)途徑可以刺激細(xì)胞的增殖。既往的研究發(fā)現(xiàn)M<,1>、M<,2>、M<,3

4、>能刺激細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，而M<,4>的這種功能則不明顯。并且起調(diào)節(jié)作用的主要是M<,3>受體。這說(shuō)明M<,3>受體表達(dá)的變化在腫瘤發(fā)生中具有重要的作用，了解M<,3>受體在正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌組織中的表達(dá)變化規(guī)律對(duì)于探討其在前列腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其分子生物學(xué)機(jī)制具有重要的意義。 在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞的增殖與新生血管的形成是重要的環(huán)節(jié)，在乳腺癌的LMM3細(xì)胞系的研究發(fā)現(xiàn)，其主要受體亞型為M<

5、,3>，且表達(dá)量是LM3細(xì)胞的40倍。膽堿能受體激動(dòng)劑CARB能夠刺激LMM3細(xì)胞的生長(zhǎng)與新生血管生成，選擇性的M<,3>受體拮抗劑pf-HHSiD能抑制這種作用，并且試驗(yàn)表明CARB能刺激VEGF-A的表達(dá)，選擇性的M<,3>受體拮抗劑pf-HHSiD也能抑制這種作用。這說(shuō)明M<,3>受體在LMM3細(xì)胞的生長(zhǎng)與血管生成中起著十分重要的作用。目前關(guān)于M<,3>受體與良性前列腺增生、前列腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系方面的研究還很少，并且已有的研究也

6、是在沒(méi)有嚴(yán)格意義上的正常對(duì)照的基礎(chǔ)上完成的。 文獻(xiàn)報(bào)道腫瘤內(nèi)微血管密度(microvessel density MVD)反映了腫瘤間質(zhì)血管生成的強(qiáng)度，隨著MVD的增高，腫瘤的復(fù)發(fā)呈上升趨勢(shì)。目前MVD已經(jīng)成為評(píng)價(jià)腫瘤組織內(nèi)新生血管形成程度的重要指標(biāo)。 研究前列腺組織中VEGF與內(nèi)皮抑素、M3受體三者在前列腺正常組織與腫瘤組織中的表達(dá)關(guān)系對(duì)于研究M3受體在前列腺腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，對(duì)于深入研究前列腺腫瘤的發(fā)生與發(fā)展機(jī)制以

7、及對(duì)于晚期腫瘤治療靶點(diǎn)的選擇均具有重要的意義，此研究在人體前列腺腫瘤還未查見相關(guān)報(bào)道。 方法： 本研究分兩部分進(jìn)行，第一部分，首先應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法對(duì)M受體及其各亞型在正常前列腺各區(qū)帶的mRNA表達(dá)進(jìn)行研究，探討各亞型在各區(qū)帶的基因表達(dá)差異，然后進(jìn)一步對(duì)在前列腺組織表達(dá)較高并與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的三種受體亞型(M<,1>、M<,2>、M<,3>)通過(guò)Westem blot方法檢測(cè)其在正常前列腺、良性前列腺增生

8、、前列腺癌組織中的表達(dá)差異，獲得各亞型在不同前列腺組織中的蛋白表達(dá)特征，分析不同亞型在前列腺正常功能發(fā)揮與疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用。第二部分，先通過(guò)RT-PCR方法研究M<,3>、VEGF、ES在正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌三種組織的基因表達(dá)，再應(yīng)用免疫組化及Western blot兩種方法并對(duì)比CD34的表達(dá)綜合對(duì)比VEGF與內(nèi)皮抑素在正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌三種組織中的蛋白表達(dá)差異，分析這兩種物質(zhì)的表達(dá)在前列腺腫瘤

9、發(fā)生、發(fā)展中的作用及與前列腺癌臨床分期、gleason評(píng)分的關(guān)系：最后通過(guò)與M<,3>受體在正常前列腺與良性前列腺增生、前列腺癌中的表達(dá)進(jìn)行對(duì)比研究，進(jìn)～步探討M<,3>受體在前列腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。這對(duì)于以后前列腺疾病治療藥物靶點(diǎn)的開發(fā)具有重要的意義。 結(jié)論： 1、前列腺各個(gè)區(qū)帶均有不同程度的5種M受體亞型的基因表達(dá)，主要以M<,2>、M<,3>、M<,1>為主。 2、M<,2>、M<,3>、M<,1