環(huán)孢素所致小鼠急性肝損傷模型的建立及保肝解毒顆粒對(duì)其干預(yù)作用的研究.pdf

1、[目的]探索應(yīng)用環(huán)孢素建立小鼠急性肝損傷模型的相對(duì)合適劑量及時(shí)間，并探討環(huán)孢素所致小鼠急性肝損傷的發(fā)病機(jī)理及保肝解毒顆粒對(duì)其的干預(yù)機(jī)制。 [方法](1)昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為正常、低倍、中倍、高倍劑量造模組和空白對(duì)照組5組，每組10只。造模各組分別以環(huán)孢素0.054g/kg，0.270g/kg，0.540g/kg，0.8l0g/kg的劑量灌胃1次。檢測(cè)血清ALT、AST，并做肝組織病理形態(tài)學(xué)觀察。(2)昆明種小鼠90只，隨機(jī)

2、分為空白對(duì)照1組，模型組、甘利欣對(duì)照組各4組，分別于造模后18、36、54、72小時(shí)處死。陽(yáng)性對(duì)照組造模前連續(xù)5天以甘利欣75mg/kg的混懸液按0.2ml/10g劑量灌胃，模型組和空白對(duì)照組給以同劑量的蒸溜水灌胃，最后一次灌胃后禁食12小時(shí)，模型組、陽(yáng)性對(duì)照組以環(huán)孢素540mg/kg劑量灌胃1次。處死前分別禁食(不禁水)16小時(shí)?？瞻讓?duì)照組給以等體積的生理鹽水灌胃。檢測(cè)血清ALT，并做肝組織病理形態(tài)學(xué)觀察。(3)昆明種小鼠60只，隨機(jī)

3、分為模型組，保肝解毒顆粒大、中、小劑量組，甘利欣對(duì)照組和空白對(duì)照組。造模前連續(xù)5天大、中、小劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組分別以保肝解毒顆粒21.6g/kg，10.8g/kg，5.4g/kg、甘利欣75mg/kg灌胃。除空白組外，各組以環(huán)孢素540mg/kg劑量灌胃1次。分別檢測(cè)血清ALT、AST、SOD、MDA、GSH-PX、IL-18，觀察肝組織普通病理形態(tài)學(xué)和電鏡下肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，并應(yīng)用TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡。 [結(jié)果](1)

4、應(yīng)用環(huán)孢素灌胃后，小鼠在540mg/kg劑量出現(xiàn)ALT、AST明顯升高，與空白組比較有顯著意義(P＜0.05)，肝細(xì)胞病變以濁腫為主，肝竇部分消失。(2)應(yīng)用540mg/kg劑量的環(huán)孢素灌胃時(shí)，小鼠在18小時(shí)出現(xiàn)ALT明顯升高，與空白組比較有顯著意義(P＜0.05)，肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯的損傷病理改變。36、54、72小時(shí)組小鼠ALT繼續(xù)升高，肝細(xì)胞損傷病理改變嚴(yán)重，死亡率逐漸提高。(3)模型組小鼠血清ALT、AST、MDA水平明顯升高，SO

5、D和GSH-PX水平明顯降低(P＜0.05)。各劑量保肝解毒顆粒及甘利欣均可有效降低小鼠血清ALT、AST、MDA水平，顯著提高SOD和GSH-PX水平，與模型組比較均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)環(huán)孢素可使小鼠血清IL-18水平顯著降低，與空白組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。各劑量保肝解毒顆粒及甘利欣在提高小鼠血清IL-18水平方面與模型組比較均無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(5)環(huán)孢素模型組小鼠肝細(xì)胞變性程

6、度嚴(yán)重，保肝解毒顆粒各劑量及甘利欣組小鼠肝細(xì)胞變性程度均有所改善，其中尤以大、中劑量組和甘利欣組效果最佳。(6)環(huán)孢素能夠誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞發(fā)生凋亡，保肝解毒各劑量組均可使環(huán)孢素所致DILI小鼠肝細(xì)胞凋亡程度有所減輕，其中尤以大、中劑量效佳。(7)模型組小鼠肝細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量脂滴；線(xiàn)粒體有的較豐富，有的明顯減少，線(xiàn)粒體嵴部分變短或消失，嵴間腔擴(kuò)大，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有水腫現(xiàn)象和核糖體脫離現(xiàn)象，呈囊泡狀或囊?guī)?；高爾基體呈囊泡狀或囊?guī)睿患?xì)胞核常染色質(zhì)增多

7、，異染色質(zhì)減少。保肝解毒顆粒各劑量和甘利欣組均可使肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)得到不同程度的恢復(fù)，尤以大、中劑量組效果最佳。 [結(jié)論]應(yīng)用環(huán)孢素灌胃造成小鼠急性肝損傷的相對(duì)合適劑量為540mg/kg，相對(duì)合適時(shí)間為18小時(shí)。環(huán)孢素對(duì)肝細(xì)胞造成損傷的主要病理變化為肝細(xì)胞脂肪變性，還可影響肝細(xì)胞的能量及蛋白代謝。環(huán)孢素致小鼠急性肝損傷發(fā)生機(jī)理與自由基脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和細(xì)胞凋亡關(guān)系密切。 濕熱毒蘊(yùn)、肝脾不和是DILI的基本病機(jī)，清熱除濕解毒、

8、調(diào)肝健脾和胃是治療DILI的根本大法。保肝解毒顆粒具有清熱燥濕、涼肝解毒、疏肝理氣、健脾和胃之功效，是防治DILI行之有效的中藥制劑。 保肝解毒顆?？捎行Ы档铜h(huán)孢素致DILI小鼠血清ALT、AST、MDA水平，顯著升高SOD和GSH-PX水平，不同程度地使肝細(xì)胞損傷、凋亡和肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化得到改善。保肝解毒顆粒對(duì)抗急性DILI的作用機(jī)理主要與其抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和抑制肝細(xì)胞凋亡等有關(guān)，而與肝細(xì)胞核酸代謝影響關(guān)系不大。