脫氧核酶對基質(zhì)金屬蛋白酶-9mRNA的體外剪切-骨肉瘤基因治療的新策略.pdf

1、脫氧核酶是利用體外分子進化技術(shù)獲得的一種具有催化功能的單鏈DNA片段,具有高效的催化活性和結(jié)構(gòu)識別能力.迄今已發(fā)現(xiàn)了幾十種脫氧核酶,根據(jù)其功能分為7大類別.其中最特別的是具有RNA切割活性的脫氧核酶,它能催化RNA特定部位的切割反應(yīng),從mRNA水平對基因滅活,從而調(diào)控蚩白質(zhì)的表達.脫氧核酶有司能成為對抗病毒感染、腫瘤等疾病的新型基因治療藥物和基因功能研究、核酸突變分析等的新型核酸工具酶.因此我們自行設(shè)計、合成了針對MMP-9 mRNA的

2、脫氧核酶,試圖采用脫氧核酶技術(shù)抑制MMP-9的表達,以探討骨肉瘤基因治療的新途徑.研究內(nèi)容分為三部分:第一部分:用RT-PCR檢測MMP-9在人骨肉瘤細胞株U-2OS中mRNA的表達及MMP-9高保守區(qū)基因的亞克隆.目的:檢測MMP-9在人骨肉瘤細胞株U-2OS中mRNA的表達,以探討MMP-9在骨肉瘤細胞生長轉(zhuǎn)移中的作用.用分子克隆構(gòu)建MMP-9的真核表達載體,作為體外轉(zhuǎn)錄的模板.第二部分:抗MMP-9脫氧核酶的合成目的:人工合成抗M

3、MP-9脫氧核酶,使其能夠作為剪切MMP-9mRNA的工具.結(jié)論:通過合成針對MMP-9 mRNA特異性脫氧核酶,提供了剪切MMP-9 mRNA的工具.第三部分 MMP-9基因片段的體外轉(zhuǎn)錄和體外剪切 目的:體外合成MMP-9 mRNA片段,在一定條件下和脫氧核酶混合,觀察剪切活性.結(jié)論:人工合成的特異性脫氧核酶體外可成功剪切MMP-9 mRNA,從而可以利用該特性在細胞內(nèi)剪切MMP-9 mRNA,達到抑制MMP-9蛋白表達的目的,從而