盾殼霉生長和產孢相關基因CmTERT的功能研究.pdf

1、盾殼霉是植物病原真菌核盤菌的重寄生菌，在菌核病的生物防治中具有舉足輕重的作用。在前期，實驗室通過農桿菌介導的轉化(ATMT)獲得了盾殼霉的T-DNA插入突變體庫。通過篩選發(fā)現(xiàn)突變體ZS-1TN4685表型異常。通過克隆T-DNA插入位點的側翼序列，并將其在盾殼霉基因組中進行比對，發(fā)現(xiàn)破壞了基因Cm03805。本研究以ZS-1TN4685為研究材料，并對基因Cm03805的功能進行了初步研究，研究結果如下:
　　1.與野生型ZS-1

2、相比，突變體ZS-1TN4685菌落形態(tài)不規(guī)則，生長速率下降。在生長后期，菌落生長停止，且不能長滿整個培養(yǎng)皿。在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)菌絲尖端彎曲、分枝增多。此外，突變體產孢量下降，但孢子寄生菌核的能力無顯著差別。
　　2.將基因Cm03805在NCBI上進行比對發(fā)現(xiàn)該基因含有端粒酶RNA結合結構域和端粒酶逆轉錄酶特異性結構域，故將該基因命名為CmTERT。克隆該基因發(fā)現(xiàn)其全長為4155bp，含有10個外顯子，9個內含子，編碼1168個

3、氨基酸。
　　3.通過本地blast比對，發(fā)現(xiàn)基因CmTERT在盾殼霉基因組中為單拷貝。進化分析發(fā)現(xiàn)該蛋白與番茄匍柄霉的端粒酶逆轉錄酶具有較高的同源性。對CmTERT的表達動態(tài)分析發(fā)現(xiàn)該基因在分生孢子器形成起始期表達量高。
　　4.根據(jù)同源重組的原理，對CmTERT進行了基因敲除，獲得了4株該基因的敲除轉化子。與野生型ZS-1相比，基因CmTERT的敲除突變體生長速率降低，菌絲尖端彎曲、分枝增多，生物學產量降低，菌絲ROS含