八氯二丙醚遺傳毒性與作用機(jī)理研究及車間空氣檢測(cè).pdf

1、八氯二丙醚(S<,2>)是農(nóng)藥增效劑的主要品種之一。它對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類、有機(jī)磷類農(nóng)藥均有增效作用，廣泛用于蚊香、噴霧劑、氣霧劑和熏蒸劑，配有增效劑的制劑作為農(nóng)田殺蟲(chóng)劑的品種制劑，在解決抗藥性的問(wèn)題上效果良好。關(guān)于S<,2>安全性的研究國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道，包括一般毒性、遺傳毒性、免疫毒性等，但對(duì)其遺傳毒性的評(píng)價(jià)結(jié)論并不一致。為深入探討S<,2>的遺傳毒性，本研究進(jìn)行了體外細(xì)胞培養(yǎng)、整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及接觸人群方面的研究。通過(guò)DNA蛋

2、白交聯(lián)試驗(yàn)、微核試驗(yàn)、蛋白質(zhì)氧化試驗(yàn)以及DNA合成影響試驗(yàn)，探討了S<,2>在體外及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)條件下的遺傳毒性，并從氧化應(yīng)激的角度闡述了其毒性機(jī)理；應(yīng)用氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)了成品S<,2>與生產(chǎn)原料在車間空氣中的濃度，并進(jìn)行了生產(chǎn)工人DNA蛋白交聯(lián)、p53蛋白等生物指標(biāo)的監(jiān)測(cè)；以及S<,2>與人體血紅蛋白體外相互作用的研究，通過(guò)上述研究工作為進(jìn)一步評(píng)價(jià)S<,2>的遺傳毒性與毒作用機(jī)理，及制定S<,2>生產(chǎn)的職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)

3、。 在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究中采用MTT法測(cè)出S<,2>對(duì)CHL細(xì)胞的半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度(IC<,50>)為5.478μg/ml。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行氧化損傷實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，一定濃度的sz在染毒24h及48h時(shí)可誘導(dǎo)CHL細(xì)胞產(chǎn)生大量羥自由基，從而導(dǎo)致抗氧化酶活性發(fā)生改變，進(jìn)而影響NO合成與代謝，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化的發(fā)生。應(yīng)用DNA熒光定量測(cè)定方法，檢測(cè)了S<,2>對(duì)CHL細(xì)胞的DNA合成的影響，結(jié)果顯示，染毒濃度為0.20μg/ml及以上時(shí)，隨

4、著染毒濃度的增加，DNA合成減少，而在該濃度以下時(shí)則表現(xiàn)為DNA合成增加；0.25μg/ml脫離染毒后4、6、12h內(nèi)則表現(xiàn)為DNA合成繼續(xù)減少。采用 SDS-KCL沉淀法檢測(cè)了S<,2>對(duì)CHL細(xì)胞DNA蛋白的交聯(lián)作用，結(jié)果顯示，染毒0.5、1.0、2.0μg/ml濃度的S<,2>可引起CHL細(xì)胞DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)率較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)。同時(shí)檢測(cè)了S<,2>染毒不同時(shí)間對(duì)CHL細(xì)胞微核率的影響，結(jié)果未見(jiàn)S<,2>有誘發(fā)CH

5、L細(xì)胞微核率升高的作用。 在整體動(dòng)物試驗(yàn)方面檢測(cè)了不同染毒濃度S<,2>(282，564，1128 mg/m<'3>，每天1h，連續(xù)染毒20d)對(duì)小鼠各臟器的氧化損傷情況，結(jié)果表明，小鼠肺、肝、脾SOD、GSH-Px的活性高劑量(1128mg/m<'3>)染毒組與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)；肺MDA含量隨染毒劑量的增加而增加，且呈劑量-反應(yīng)關(guān)系(r=0.987，P<0.05)。各臟器羰基化蛋白含量的測(cè)定結(jié)果顯示，肺、

6、肝、脾蛋白出現(xiàn)了不同程度的氧化損傷(P<0.05)，其中肺組織蛋白損傷最為明顯，高、中、低劑量組和對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且有明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系(r=0.975，P=0.0248)，肝、脾組織影響較小，僅高劑量組與對(duì)照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。在DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)(DPC)方面，肺DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)率隨染毒劑量的增加而增加，高、中、低劑量組與對(duì)照組比較，差異均有顯著性，但并不呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，肝DPC含量?jī)H高劑量(11

7、28 mg/m<'3>)組與對(duì)照組比有顯著性差異(P<0.05)，腎、脾則各濃度組之間均未見(jiàn)異常。采用熒光染色法觀察了染毒不同時(shí)間對(duì)小鼠外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞微核率的影響，結(jié)果未見(jiàn)S<,2>有誘發(fā)網(wǎng)織紅細(xì)胞微核率升高的作用。 應(yīng)用氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法分析了生產(chǎn)車間空氣中成品與原料的濃度，結(jié)果顯示S<,2>僅在成品出口采樣點(diǎn)檢測(cè)到，濃度為1.33 mg/m<'3>，而其它各采樣點(diǎn)均可檢測(cè)到三氯乙烯，濃度范圍為0.83～21.82mg/m

8、<'3>，此外在不同的作業(yè)崗位還有二氯甲烷、一氟丙烯、丙烯等有機(jī)物的存在。采集S<,2>作業(yè)人群靜脈血檢測(cè)氧化損傷、DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)及p53蛋白表達(dá)情況，結(jié)果表明，接觸組血.清SOD、GSH-Px酶活性略高低于對(duì)照組，差異無(wú)顯著性，而脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的增高與對(duì)照組.相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生產(chǎn)工人DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)率則顯著增高，且這種損傷程度與年齡、吸煙等因素不存在關(guān)聯(lián)性(P>0.05)，接觸組血清p53蛋白水平略高于對(duì)照組，差異

9、無(wú)顯著性，但在接觸組中工齡大于8年的人群血清p53蛋白水平顯著高于工齡小于8年的人群，差異具有顯著性(P<0.05)。另外，為弄清S<,2>與人體血紅蛋白體外相互作用情況，通過(guò)超濾法結(jié)合氣相色譜/質(zhì)譜法對(duì)s<,2>與血紅蛋白體外相互作用進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，在所選擇特定條件下，未經(jīng)代謝的S<,2>不能與人體血紅蛋白結(jié)合形成大分子加合物。 研究表明：S<,2>可導(dǎo)致DNA損傷，除了既往已有的研究提示可造成DNA斷裂、交聯(lián)外，體外細(xì)胞

10、實(shí)驗(yàn)顯示，S<,2>可引起CHL，細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，從而引起細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)DNA的損傷，表現(xiàn)為DNA蛋白交聯(lián)、DNA合成受到影響；整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，S<,2>經(jīng)吸入染毒可誘導(dǎo)機(jī)體主要組織臟器肺、肝、脾的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA和抗氧化酶活性的改變，通過(guò)檢測(cè)可見(jiàn)，S<,2>能引起組織細(xì)胞DNA蛋白交聯(lián)及蛋白氧化，但未能誘發(fā)小鼠外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞微核率的升高；對(duì)接觸人群的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，s<,2>可引起機(jī)體氧化應(yīng)激及血清p53蛋白