人瘢痕疙瘩中CASK、Id1表達的研究及青蒿琥酯對其表達的影響.pdf

1、目的：為了證實CASK和Id1與瘢痕疙瘩的形成存在關(guān)系，首先應(yīng)用免疫組織化學(xué)法觀察正常皮膚和瘢痕疙瘩組織中CASK和Id1的表達差異，然后進一步應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法和Westem blotting法觀察體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中CASK和Id1的表達，并觀察在青蒿琥酯干預(yù)作用后CASK和Id1的表達變化，為從CASK和Id1信號通路研究瘢痕疙瘩細(xì)胞增殖調(diào)控發(fā)生機理提供理論基礎(chǔ)，探討青蒿琥酯抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖的作用機理。

2、 方法： (1)收集臨床手術(shù)切除的瘢痕疙瘩組織15例和正常皮膚組織14例，采用免疫組化SP法研究CASK和Id1在瘢痕疙瘩組織和正常皮膚組織中的表達及差異。 (2)采用組織塊貼壁法進行瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，成功培養(yǎng)出14例，使用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，37℃，5％CO2，飽和濕度下培養(yǎng)。將10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L的青蒿琥酯與其共同培養(yǎng)一段時間后，采用MTT計數(shù)

3、法篩選Dm值，再按其Dm設(shè)計實驗組。觀測瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)組(對照組)和青蒿琥酯干預(yù)作用組(處理組)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)培養(yǎng)生長曲線、分裂指數(shù)，并采用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀測兩組瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中CASK和Id1蛋白的表達情況，采用Westem blotting法檢測兩組CASK和Id1蛋白的表達變化。 結(jié)果： (1)在14例瘢痕疙瘩組織細(xì)胞中CASK和Id1陽性表達分別是26.7％和80.0％。正常皮膚組織中CASK和

4、Id1陽性表達分別是75.0％和25.0％。CASK陽性表達在瘢痕疙瘩組織中低于正常皮膚組織，Id1陽性表達在瘢痕疙瘩組織中高于正常皮膚組織，兩組比較有顯著性差異(P＜0.05)。 (2)對照組和處理組瘢痕疙瘩成纖維細(xì)培養(yǎng)比較，顯示青蒿琥酯對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞有明顯的生長抑制作用，其作用特點呈濃度依賴性，其IC50為60mg/L。青蒿琥酯呈劑量及時間依賴性地抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖，青蒿琥酯使生長曲線不同程度的壓低、分裂指數(shù)

5、下降，光鏡下細(xì)胞突起變短，細(xì)胞由梭形變成橢圓形，核固縮、碎裂。 (3)青蒿琥酯作用24h后，采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中的CASK表達增加，Id1表達減少；采用Westernblotting法發(fā)現(xiàn)，青蒿琥酯作用前CASK蛋白條帶和Idl蛋白條帶與β-actin蛋白條帶的比值分別為1.073±0.047和1.421±0.051，作用后CASK和Idl分別為1.352±0.052和0.984±0.064，青蒿琥酯作

6、用前后CASK和Idl的表達水平有顯著差別(P＜0.05)。 結(jié)論： (1)免疫組織化學(xué)法表明正常皮膚和瘢痕疙瘩組織中CASK和Idl的表達差異，提示CASK和Idl的表達變化與在瘢痕疙瘩的形成有關(guān)，這對后續(xù)實驗提供了一定的理論基礎(chǔ)。 (2)體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞用青蒿琥酯作用后，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖過程中CASK和Idl蛋白表達出現(xiàn)變化，CASK可能作為Idl的上游信號分子，參與成纖維細(xì)胞的增殖調(diào)控。