玉米幼芽提取物對(duì)果蠅和小鼠睪丸抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、為了探討玉米幼芽提取物(Extract from Maize Plumule)對(duì)果蠅壽命、抗氧化能力的影響；對(duì)小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)、功能和抗氧化酶活性的影響：對(duì)原代培養(yǎng)大鼠睪丸Leydig細(xì)胞睪酮合成和分泌功能的影響。方法1.果蠅衰老模型的建立。收集羽化8 h內(nèi)的黑腹果蠅，隨機(jī)分組，以添加D-半乳糖(6.5％)及不同濃度玉米幼芽提取物(0 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg，80 mg/kg)的培養(yǎng)基飼喂，分別測定10、20、3

2、0、40日齡時(shí)果蠅體內(nèi)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性及丙二醛(malondialdchyde，MDA)含量。果蠅壽命實(shí)驗(yàn)：每天定時(shí)記錄果蠅存活數(shù)，直至最后一只果蠅死亡，計(jì)算果蠅平均壽命和最高壽命。果蠅體內(nèi)水分含量的測定：飼養(yǎng)至4 d后，將果蠅稱初重，放入干燥箱中(55℃)，干燥1 h后再次稱重，測定果蠅體內(nèi)水分含量；果蠅耐饑餓能力實(shí)驗(yàn)：飼養(yǎng)至4 d后，放入恒溫培養(yǎng)箱中(25℃)，每天定時(shí)記錄果蠅存

3、活數(shù)，計(jì)算果蠅耐饑餓能力。果蠅抗熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)：飼養(yǎng)至10 d后，將果蠅放入潔凈的玻璃培養(yǎng)瓶，潤濕棉塞，置于恒溫培養(yǎng)箱中(40℃)，每隔1 h觀察并記錄果蠅死亡數(shù)量，計(jì)算各組存活率。 2.小鼠衰老模型的建立。小鼠頸背部皮下注射D-半乳糖(5 g/L，125 mg/kg·BT)，連續(xù)6周，制備D-半乳糖亞急性衰老小鼠模型。同時(shí)灌胃不同濃度玉米幼芽提取物，劑量依次為10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg，按20 ml/kg

4、·BW灌胃。灌胃結(jié)束后第二天，檢測小鼠血清睪酮(testosterone，T)含量和睪丸組織SOD、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione perocidase，GSH-PX)活性及一氧化氮(nitric oxide，NO)、MDA含量。取各組小鼠附睪，檢測附睪精子功能，包括精子計(jì)數(shù)、精子活率測定。睪丸組織切片HE染色，顯微鏡觀察組織結(jié)構(gòu)變化。透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化。 3.睪丸Leydig細(xì)胞衰老模型的建立。取SD大鼠(2

5、50～300 g)睪丸，用消化法制各細(xì)胞懸液，10％血清DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)，3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)染色鑒定睪丸Leydig細(xì)胞。原代培養(yǎng)細(xì)胞加入不同濃度的玉米幼芽提取物(5 mg/L，10 mg/L，20 mg/L)培養(yǎng)18 h后，再加入H<,2>O<,2>(30％H<,2>O<,2>，50 μM培養(yǎng)基)制備細(xì)胞衰老模型，6h后取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液，檢測T、SOD、MDA，細(xì)胞HE染色。四噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)測定細(xì)

6、胞的存活率。結(jié)果1.玉米幼芽提取物80 mg/kg能極顯著延長果蠅平均壽命和最高壽命(P<0.01)，提高30、40日齡時(shí)果蠅SOD活性、降低MDA含量(0.01

7、A含量(P<0.01)。給藥組小鼠睪丸生精細(xì)胞數(shù)目增多、排列有序，管腔內(nèi)精子數(shù)目增多。生精細(xì)胞細(xì)胞器數(shù)目增多，線粒體形態(tài)完整，細(xì)胞核清晰。Leydig細(xì)胞數(shù)目增多，細(xì)胞核清晰、顆粒狀分布。 3.3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)染色鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞為睪丸Leydig細(xì)胞。玉米幼芽提取物20 mg/L能極顯著提高原代培養(yǎng)大鼠睪丸Leydig細(xì)胞睪酮合成和分泌的能力(P<0.01)，保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性。 結(jié)論 1.

8、玉米幼芽提取物具有延長果蠅壽命、提高果蠅抗氧化能力的作用。 2.玉米幼芽提取物可提高D-半乳糖致衰老小鼠睪丸抗氧化能力，提高血清T水平，對(duì)睪丸組織超微結(jié)構(gòu)有保護(hù)和促進(jìn)作用，具有延緩睪丸衰老的作用。 3.玉米幼芽提取物可提高原代培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞合成和分泌睪酮的能力，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性，具有延緩雄性性腺衰老的作用。 綜上所述，玉米幼芽提取物具有延長果蠅壽命、延緩小鼠睪丸衰老、維持并提高原代培養(yǎng)大鼠睪丸Leydig