MaWRKY26與MaVQ5蛋白互作調(diào)控MeJA誘導(dǎo)香蕉果實(shí)耐冷性的機(jī)制.pdf

1、香蕉在低溫貯運(yùn)低于13℃時(shí)易發(fā)生冷害。因此，研究香蕉果實(shí)采后冷害以及耐冷性機(jī)制對(duì)提高其商品價(jià)值具有重要意義。WRKY是一類(lèi)植物特有的轉(zhuǎn)錄因子，在植物生長(zhǎng)發(fā)育、激素調(diào)節(jié)和逆境響應(yīng)等方面發(fā)揮重要作用。茉莉酸（JA）在植物的生長(zhǎng)發(fā)育和脅迫響應(yīng)中也具有重要的作用。然而，JA轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制還不清楚。本文的研究目的在于闡明香蕉果實(shí)MaWRKY26轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控JA合成中的作用以及與茉莉酸甲酯（MeJA）誘導(dǎo)耐冷性的關(guān)系。
　　本文在獲得香蕉果實(shí)

2、MaWRKY26基因全長(zhǎng)序列的基礎(chǔ)上，分析MaWRKY26基因的特性以及對(duì)冷脅迫和 MeJA的響應(yīng)，MaWRKY26調(diào)控 JA合成相關(guān)基因的表達(dá)，MaWRKY26與MaVQ蛋白的互作及互作后對(duì)調(diào)控JA合成相關(guān)基因的影響，期望闡明MaWRKY26響應(yīng)冷脅迫和調(diào)控MeJA誘導(dǎo)耐冷性的分子機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：
　　1.實(shí)時(shí)熒光定量分析表明，冷脅迫誘導(dǎo)了MaWRKY26的表達(dá)，外源MeJA處理對(duì)MaWRKY26的誘導(dǎo)表達(dá)更強(qiáng)，說(shuō)明Ma

3、WRKY26響應(yīng)冷脅迫，并且可能與MeJA誘導(dǎo)的耐冷性有一定關(guān)系。
　　2.克隆了MaWRKY26基因全長(zhǎng)的cDNA序列。氨基酸序列和進(jìn)化樹(shù)分析表明，MaWRKY26含有兩個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域，屬于WRKY家族的第I類(lèi)。亞細(xì)胞定位顯示，MaWRKY26定位于細(xì)胞核，為核蛋白。轉(zhuǎn)錄活性分析表明MaWRKY26具有轉(zhuǎn)錄激活活性，是一個(gè)轉(zhuǎn)錄激活子。
　　3．凝膠阻滯分析（EMSA）和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示，MaWRKY26能夠結(jié)合

4、JA生物合成基因MaLOX2、MaAOS3和MaOPR3的啟動(dòng)子，并激活其活性。
　　4.酵母雙雜交（Y2H）、雙分子熒光互補(bǔ)（BiFC）和免疫共沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)分析證實(shí) MaVQ5蛋白能與 MaWRKY26互作，進(jìn)一步分析顯示 MaVQ5減弱了MaWRKY26激活MaLOX2、MaAOS3和MaOPR3啟動(dòng)子的能力。
　　上述結(jié)果表明，MaWRKY26通過(guò)直接調(diào)控JA合成基因來(lái)參與調(diào)控香蕉果實(shí)對(duì)冷脅迫和MeJA誘導(dǎo)的