谷氨酸受體在鋁致小鼠學(xué)習(xí)記憶損傷中的作用.pdf

1、目的：觀察鋁致小鼠的病理組織學(xué)以及神經(jīng)行為的變化，研究代謝型谷氨酸受體和N—甲基—D—天冬氨酸受體(N—methyl—D—aspartatereceptor、NMDAR)在鋁致學(xué)習(xí)記憶損傷中的作用。 方法：取健康6月齡雄性C57BL小鼠40只，按體重隨機(jī)分為4組，每組10只即對(duì)照組(人工腦脊液組)、低劑量組(0.25％AlCl3)、中劑量組(0.5％AlCl3)、高劑量組(1％AlCl3)，連續(xù)五天經(jīng)側(cè)腦室分別注射上述液體3μl

2、，12天后跳臺(tái)試驗(yàn)、避暗試驗(yàn)和Morris水迷宮試驗(yàn)，測(cè)定動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力，而后猝死小鼠，取腦，觀察小鼠組織學(xué)變化。用RT—PCR檢測(cè)mGluR1、mGluR3、mGluR7、NMDAR1、NMDAR2B在小鼠腦內(nèi)的表達(dá)，用免疫組化和Westernblot檢測(cè)NMDAR1、NMDAR2B在小鼠腦內(nèi)的表達(dá)。 結(jié)果：小鼠學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試：1)在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)中，與溶劑對(duì)照組相比，低劑量組潛伏期縮短(P＜0.05)中劑量組EN1和EN2均

3、明顯增加(P＜0.01)、潛伏期縮短(P＜0.05)；高劑量組EN1和EN2增加(P＜0.05)、潛伏期明顯縮短(P＜0.01)；2)在避暗實(shí)驗(yàn)中，與溶劑對(duì)照組相比，。低劑量組的EN2增加(P＜0.05)；中劑量組EN2明顯增加(P＜0.01)、潛伏期縮短(P＜0.05)；高劑量組EN2均明顯增加(P＜0.01)、潛伏期均明顯縮短(P＜0.01)；3)在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，與溶劑對(duì)照組相比，在4天的定位航行實(shí)驗(yàn)中，中劑量組和高劑量

4、組逃避潛伏期增加(P＜0.05)；在第5天的空間搜索實(shí)驗(yàn)中，中劑量組和高劑量組原平臺(tái)象限停留時(shí)間顯著縮短(P＜0.01)，穿越平臺(tái)次數(shù)顯著減少(P＜0.01)，原平臺(tái)象限游泳距離減少(P＜0.05)。病理組織學(xué)結(jié)果：常規(guī)HE染色鏡下可見(jiàn)對(duì)照組小鼠海馬錐體層神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，排列整齊，隨著染鋁劑量增加，細(xì)胞排列逐漸變零亂，高劑量組可見(jiàn)細(xì)胞連接松解，胞漿濃縮、深染、細(xì)胞核固縮，細(xì)胞周圍出現(xiàn)環(huán)狀帶。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：鏡下可見(jiàn)各組小鼠

5、海馬區(qū)錐體細(xì)胞層均有大量免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元，NMDAR1和NMDAR2B陽(yáng)性反應(yīng)定位于細(xì)胞胞膜上，呈棕黃色。并可見(jiàn)隨著染毒劑量的加大，免疫陽(yáng)性表達(dá)呈增多的現(xiàn)象。RT—PCR和Westernblot檢測(cè)海馬mGluR1、mGluR3、mGluR7、NMDAR1和NMDAR2B的基因和蛋白表達(dá)可知：與對(duì)照組相比，低劑量組mGluR1的基因和蛋白表達(dá)尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，中、高劑量組mGluR1的基因和蛋白表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義(P＜0.05)；與對(duì)照組相比，中，高劑量組mGluR3基因表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)蛋白表達(dá)各組未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與對(duì)照組相比，低劑量組mGluR7基因表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；中，高劑量組mGluR7基因表達(dá)顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，中，高劑量組mGluR7蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與對(duì)照組相比，低劑量組中NMDAR1和NMDAR2B的基因和蛋白表達(dá)沒(méi)有明

7、顯變化(P＞0.05)；中劑量組NMDAR1的基因和蛋白表達(dá)均升高(P＜0.05)，NMDAR2B的蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)；高劑量組NMDAR1的基因表達(dá)升高(P＜0.05)，NMDAR2B的基因表達(dá)顯著升高(P＜0.01)，NMDAR2B的蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，NMDAR1的蛋白表達(dá)顯著升高(P＜0.01)。 結(jié)論：鋁可導(dǎo)致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力發(fā)生改變，并可使小鼠海馬腦區(qū)錐體層神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，且隨劑量的增加