代謝型谷氨酸受體調(diào)控β-APP表達(dá)在鋁神經(jīng)毒性中的作用.pdf

1、目的：通過(guò)染鋁體外神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，研究β-APP在鋁致神經(jīng)細(xì)胞丟失與鋁致神經(jīng)毒性的關(guān)系出發(fā)，探討代謝型谷氨酸受體與鋁致神經(jīng)毒性的關(guān)系，以及β-APP和代謝型谷氨酸受體的關(guān)系。
　　 方法：①神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)并用AlCl3 ·6H2O 染毒，使鋁的終濃度分別為0mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L。作用48h后相差顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，應(yīng)用Cell Counting Kit-8 檢測(cè)各組神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞

2、活力，AO-EB和Hoechst 染色法觀察鋁染毒細(xì)胞的存活和凋亡；流式細(xì)胞儀AnnexinV-PI 雙染法定量測(cè)定細(xì)胞的凋亡率；用熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞β-APP、mGluR1、mGluR3、mGluR7的表達(dá)。②對(duì)培養(yǎng)的原代神經(jīng)細(xì)胞用2mmol/L 鋁染毒，加入不同濃度的代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑或拮抗劑，檢測(cè)細(xì)胞的活力、流式細(xì)胞儀Annexin V-PI 雙染法定量測(cè)定細(xì)胞的凋亡率,用熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞

3、β-APP、mGluR1、mGluR3、mGluR7的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①染毒可使細(xì)胞突起萎縮,細(xì)胞胞體增大變圓、細(xì)胞數(shù)量減少,并且細(xì)胞界限不清;同時(shí)病理改變隨著Al3+濃度增加和染毒時(shí)間延長(zhǎng)而加重；AO-EB和Hoechst 染色法顯示了鋁染毒細(xì)胞的凋亡和壞死的形態(tài)學(xué)變化；神經(jīng)細(xì)胞活力試驗(yàn)結(jié)果：各組神經(jīng)細(xì)胞活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L Al3+劑量組神經(jīng)細(xì)胞的活力低

4、于0mmol/L Al3+組；流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)結(jié)果：各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），1mmol/L Al3+和2mmol/L Al3+劑量組神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率顯著高于0mmol/L Al3+組；熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，低、中劑量組mGluR1、mGluR3、mGluR7的基因和蛋白表達(dá)尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），高劑量組mGluR1的基因和蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

5、<0.01）；與對(duì)照組相比，高劑量組mGluR3、mGluR7基因和蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與對(duì)照組相比，低劑量組β-APP的基因和蛋白表達(dá)尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），中、高劑量組β-APP的基因和蛋白表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②加入Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑可以顯著改善染鋁后的神經(jīng)細(xì)胞壞死的形態(tài)學(xué)改變，加入Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體拮抗劑可以增加染鋁后的細(xì)胞壞死的形態(tài)學(xué)改變；不同濃

6、度代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑可以顯著提高神經(jīng)細(xì)胞活力(P<0.05,P<0.01)，不同濃度代謝型谷氨酸受體拮抗劑可以顯著降低細(xì)胞活力(P<0.05,P<0.01)；流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果顯示：Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑可以顯著降低神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率(P<0.01)，Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體拮抗劑可以顯著提高神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率(P<0.01)；熒光定量PCR和免疫組化結(jié)果顯示：與染鋁對(duì)照組相比，Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑可以顯著降低染鋁神經(jīng)

7、細(xì)胞的mGluR1、mGluR3、mGluR7和β-APP的基因和蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：1.鋁能夠誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，其凋亡程度與鋁的作用劑量有密切關(guān)系。2.隨著染鋁的濃度的增高β-APP表達(dá)增高，加入Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑β-APP表達(dá)下降，提示：β-APP在鋁致神經(jīng)細(xì)胞丟失與鋁致神經(jīng)毒性有關(guān)；β-APP與代謝型谷氨酸受體有關(guān)。3.鋁誘導(dǎo)mGluRs表達(dá)異常：mGluR1表達(dá)升高，mGluR3 mGluR7表達(dá)下降。