代謝型谷氨酸受體調控β-APP表達在鋁神經毒性中的作用.pdf

1、目的：通過染鋁體外神經細胞培養(yǎng)，研究β-APP在鋁致神經細胞丟失與鋁致神經毒性的關系出發(fā)，探討代謝型谷氨酸受體與鋁致神經毒性的關系，以及β-APP和代謝型谷氨酸受體的關系。
　　 方法：①神經細胞原代培養(yǎng)并用AlCl3 ·6H2O 染毒，使鋁的終濃度分別為0mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L。作用48h后相差顯微鏡觀察細胞的生長狀態(tài)，應用Cell Counting Kit-8 檢測各組神經細胞的細胞

2、活力，AO-EB和Hoechst 染色法觀察鋁染毒細胞的存活和凋亡；流式細胞儀AnnexinV-PI 雙染法定量測定細胞的凋亡率；用熒光定量PCR和免疫組化檢測神經細胞β-APP、mGluR1、mGluR3、mGluR7的表達。②對培養(yǎng)的原代神經細胞用2mmol/L 鋁染毒，加入不同濃度的代謝型谷氨酸受體激動劑或拮抗劑，檢測細胞的活力、流式細胞儀Annexin V-PI 雙染法定量測定細胞的凋亡率,用熒光定量PCR和免疫組化檢測神經細胞

3、β-APP、mGluR1、mGluR3、mGluR7的表達。
　　 結果：①染毒可使細胞突起萎縮,細胞胞體增大變圓、細胞數量減少,并且細胞界限不清;同時病理改變隨著Al3+濃度增加和染毒時間延長而加重；AO-EB和Hoechst 染色法顯示了鋁染毒細胞的凋亡和壞死的形態(tài)學變化；神經細胞活力試驗結果：各組神經細胞活力差異有統計學意義（P＜0.01），0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L Al3+劑量組神經細胞的活力低

4、于0mmol/L Al3+組；流式細胞儀定量檢測結果：各組神經細胞凋亡率差異有統計學意義（P＜0.01），1mmol/L Al3+和2mmol/L Al3+劑量組神經細胞的凋亡率顯著高于0mmol/L Al3+組；熒光定量PCR和免疫組化檢測神經細胞結果顯示：與對照組相比，低、中劑量組mGluR1、mGluR3、mGluR7的基因和蛋白表達尚未達到統計學意義（P>0.05），高劑量組mGluR1的基因和蛋白表達升高，差異有統計學意義（P

5、<0.01）；與對照組相比，高劑量組mGluR3、mGluR7基因和蛋白表達下降，差異有統計學意義（P<0.01）；與對照組相比，低劑量組β-APP的基因和蛋白表達尚未達到統計學意義（P>0.05），中、高劑量組β-APP的基因和蛋白表達均升高，差異有統計學意義（P<0.05）；②加入Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動劑可以顯著改善染鋁后的神經細胞壞死的形態(tài)學改變，加入Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體拮抗劑可以增加染鋁后的細胞壞死的形態(tài)學改變；不同濃

6、度代謝型谷氨酸受體激動劑可以顯著提高神經細胞活力(P<0.05,P<0.01)，不同濃度代謝型谷氨酸受體拮抗劑可以顯著降低細胞活力(P<0.05,P<0.01)；流式細胞儀測定結果顯示：Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動劑可以顯著降低神經細胞的凋亡率(P<0.01)，Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體拮抗劑可以顯著提高神經細胞的凋亡率(P<0.01)；熒光定量PCR和免疫組化結果顯示：與染鋁對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動劑可以顯著降低染鋁神經

7、細胞的mGluR1、mGluR3、mGluR7和β-APP的基因和蛋白表達。
　　 結論：1.鋁能夠誘導神經細胞的凋亡，其凋亡程度與鋁的作用劑量有密切關系。2.隨著染鋁的濃度的增高β-APP表達增高，加入Ⅱ、Ⅲ組代謝型谷氨酸受體激動劑β-APP表達下降，提示：β-APP在鋁致神經細胞丟失與鋁致神經毒性有關；β-APP與代謝型谷氨酸受體有關。3.鋁誘導mGluRs表達異常：mGluR1表達升高，mGluR3 mGluR7表達下降。