雷公藤紅素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞株抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要分三部分進(jìn)行了介紹：
　　第一部分
　　雷公藤紅素對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響
　　目的:觀察雷公藤紅素對(duì)人膽管癌細(xì)胞株 TFK-1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況及對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　方法:采用細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒(CCK-8)測(cè)定不同濃度的雷公藤紅素干預(yù)后,膽管癌細(xì)胞株 TFK-1在24h、48h、72h時(shí)間段的活力和增殖變化,計(jì)算生長(zhǎng)抑制率及IC50;雷公藤紅素孵育 TFK-1細(xì)胞不同時(shí)間段后,進(jìn)行 P

2、I染色,用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期改變,并觀察有無(wú)出現(xiàn)凋亡峰。
　　結(jié)果:
　　1.雷公藤紅素對(duì) TFK-1細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間和劑量依賴性,細(xì)胞活力和增殖能力隨著孵育時(shí)間延長(zhǎng)和劑量增加而逐漸下降,三個(gè)時(shí)間段的IC50分別為3.67μg/ml(24h)、1.98μg/ml(48h)、1.33μg/ml(72h);
　　2.雷公藤紅素干預(yù)后,細(xì)胞周期出現(xiàn)明顯改變,24h即可見 G2/M期阻滯,72h后最為明顯,但

3、并未出現(xiàn) Sub-G1峰。
　　結(jié)論:
　　1.雷公藤紅素可在體外抑制TFK-1細(xì)胞生長(zhǎng),并具有明顯的時(shí)間、劑量依賴性;
　　2.雷公藤紅素可以顯著調(diào)控 TFK-1細(xì)胞周期,其中G2/M期阻滯最為顯著,在延長(zhǎng)孵育時(shí)間后,效果可獲增強(qiáng)。
　　第二部分
　　雷公藤紅素對(duì)膽管癌細(xì)胞凋亡及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　目的:觀察雷公藤紅素對(duì)人膽管癌細(xì)胞株 TFK-1細(xì)胞凋亡的影響,并測(cè)定體外藥物干預(yù)后細(xì)胞凋亡相關(guān)

4、蛋白(Apoptosis-related proteins)表達(dá)變化,初步探討雷公藤紅素抑制TFK-1細(xì)胞生長(zhǎng)的可能機(jī)制。
　　方法:采用Annexin V-FITC/PI雙染法對(duì)雷公藤紅素(2μg/ml)干預(yù)不同時(shí)間段(24h、48h和72h)后的TFK-1細(xì)胞進(jìn)行染色,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;雷公藤紅素孵育 TFK-1細(xì)胞48h后,提取細(xì)胞總蛋白,采用Western Blot測(cè)定細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)改變。
　　結(jié)果

5、:
　　1.Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)果提示,雷公藤紅素干預(yù)后 TFK-1細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,呈時(shí)間依賴性,72h凋亡率可達(dá)56.01％,早凋多于晚凋;
　　2.Western Blot檢測(cè)顯示凋亡蛋白抑制因子 Survivin及Bcl-2表達(dá)下調(diào),促凋亡蛋白 Bax及Caspase-3表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.雷公藤紅素可以誘導(dǎo) TFK-1細(xì)胞凋亡,并呈時(shí)效關(guān)系;
　　2.雷公藤紅素通過(guò) C

6、aspase依賴的線粒體途徑誘導(dǎo) TFK-1細(xì)胞凋亡,其機(jī)制與下調(diào) Survivin及Bcl-2蛋白表達(dá),和上調(diào) Bax及Caspase-3蛋白表達(dá)密切相關(guān)。
　　第三部分
　　雷公藤紅素對(duì)膽管癌荷瘤鼠抗腫瘤作用及機(jī)制初探
　　目的:觀察雷公藤紅素對(duì)膽管癌荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用,并測(cè)定體內(nèi)藥物干預(yù)后移植瘤中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況,進(jìn)一步探討雷公藤紅素抗膽管癌作用的可能機(jī)制。
　　方法:建立膽管癌的裸鼠皮下移植瘤模

7、型,經(jīng)腹腔注射雷公藤紅素(1,2 mg/kg/day)后定期測(cè)量荷瘤鼠的腫瘤體積變化及體重改變,計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率;給藥結(jié)束后處死荷瘤鼠,提取腫瘤組織蛋白,經(jīng) Western Blot測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.在體內(nèi),雷公藤紅素2個(gè)濃度組均表現(xiàn)出抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用,高劑量組更為顯著(p<0.01),抑瘤率可達(dá)49.71％;兩個(gè)劑量組均未出現(xiàn)藥物相關(guān)的裸鼠死亡,但高劑量組出現(xiàn)荷瘤鼠體重下降、腹瀉現(xiàn)象;

8、r>　　2.藥物干預(yù)后體內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況與體外一致,Survivin及Bcl-2表達(dá)受抑,Bax及Caspase-3表達(dá)上調(diào),并呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　1.雷公藤紅素可以顯著抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng),并呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系,但高劑量可以出現(xiàn)一定毒副作用,其安全性有待進(jìn)一步評(píng)估;
　　2.雷公藤紅素可在體內(nèi)外通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平來(lái)誘導(dǎo) TFK-1細(xì)胞凋亡,可能經(jīng)由 NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮其抗腫