MiR-126表達(dá)上調(diào)的對(duì)膽管癌細(xì)胞抑制作用研究.pdf

1、膽管癌（Cholangiocarcinoma, CCA）是源于膽管上皮細(xì)胞惡變及肝內(nèi)外膽管內(nèi)皮細(xì)胞惡變而形成的惡性腫瘤，惡性程度極高。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在初診時(shí)超過(guò)三分之二的患者病灶已不可切除。即使手術(shù)復(fù)發(fā)率也很高。膽管癌發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的復(fù)雜過(guò)程，是多種癌基因、抑癌基因共同作用的結(jié)果。因此，深入探討膽管癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，尋找其診治的新靶點(diǎn)，對(duì)于膽管癌的早期診斷及治療、提高患者生存率、改善預(yù)后具有重要意義。
　　MicroR

2、NA(miR)是長(zhǎng)為19-25nt的非編碼小分子，能夠識(shí)別特定的靶基因mRNA3'端非編碼區(qū)（UTR），并與之結(jié)合。如果兩者堿基序列完全互補(bǔ)，則可使靶mRNA降解，如不完全互補(bǔ)，則抑制靶mRNA翻譯，影響蛋白質(zhì)表達(dá)水平。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)研究表明，microRNA能影響癌基因或抑癌基因的表達(dá)，起到調(diào)控腫瘤發(fā)展的作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)膽管癌組織中的miR-126表達(dá)顯著下調(diào)，而目前miR-126與膽管癌的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道，本文以miR-126作

3、為研究對(duì)象，深入探討其在膽管癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT）是一種上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變過(guò)程，研究證明EMT是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要機(jī)制。Slug是鋅指蛋白家族的轉(zhuǎn)錄因子，多種因素都可能誘導(dǎo)Slug表達(dá)上調(diào)， Clement G證明食管癌中胞外信號(hào)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、Wnt過(guò)表達(dá)可以誘導(dǎo)Slug的表達(dá)；C?me C發(fā)現(xiàn)卵

4、巢癌中雌二醇表達(dá)可誘導(dǎo)slug表達(dá)上調(diào)，而slug因子下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)，進(jìn)而發(fā)生EMT，增加腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miR-126具有抑制腫瘤細(xì)胞的能力，但是否通過(guò)EMT過(guò)程實(shí)現(xiàn)，尚待證實(shí)。
　　目的:探討miR-126是否具有抑制膽管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力，以及經(jīng)過(guò)miR-126過(guò)表達(dá)處理的膽管癌細(xì)胞slug、E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白mRNA及蛋白表達(dá)水平變化，進(jìn)一步闡明miR-126抑制膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移的作

5、用機(jī)制。
　　方法:采用慢病毒載體將miR-126基因感染膽管癌RBE細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組。用CCK-8法檢測(cè)膽管癌細(xì)胞活力；用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移能力；用RT-PCR法檢測(cè)Slug及EMT相關(guān)基因mRNA表達(dá)情況，Western blot檢測(cè)Slug及EMT相關(guān)基因蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果: MiR-126感染組RBE細(xì)胞的活力較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組差， p<0.05；miR-

6、126感染組細(xì)胞傷口愈合能力明顯低于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組，p<0.05；miR-126感染組細(xì)胞遷移和侵襲能力低于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組，p<0.05；miR-126感染組細(xì)胞E-鈣黏蛋白mRNA表達(dá)水平明顯高于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組，而slug、N-鈣黏蛋白、波形蛋白mRNA表達(dá)水平明顯低于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組，p<0.05。MiR-126感染組E-鈣黏蛋白表達(dá)水平低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組，slug蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白表