應用微陣列比較基因組雜交研究白念珠菌耐受氧化應激的機制.pdf

1、白念珠菌是威脅人類健康和生命的重要致病真菌，宿主主要通過吞噬細胞的呼吸爆發(fā)產(chǎn)生活性氧物質(zhì)殺傷白念珠菌，白念珠菌對氧化損傷的耐受可以導致其免疫逃逸，進一步促進感染的形成。因此深入研究白念的氧化應激機制意義重大。 目的： 本課題的研究對象是對氧化應激耐受性存在顯著差異的臨床白念珠菌，通過考察這些白念珠菌的基因組特征，尋找氧化應激耐受性形成的關(guān)鍵基因組區(qū)域和關(guān)鍵基因，力圖從基因組水平闡述白念珠菌氧化應激耐受性的形成機制，為深入

2、研究白念珠菌氧化應激機制提供新思路和線索。 方法： 本研究第一部分，以過氧化氫模擬氧化應激環(huán)境，從臨床白念珠菌菌庫中篩選獲對氧化應激耐受性存在差異的白念珠菌，通過初篩及多種實驗方法確證，獲取芯片雜交實驗菌株。 第二部分，我們通過制備白念珠菌全基因組寡核苷酸芯片，應用微陣列比較基因組雜交技術(shù)，考察了白念珠菌的基因組特征。通過實時定量PCR對芯片雜交結(jié)果進行驗證。應用聚類分析，對芯片雜交結(jié)果進行聚類。通過Cluste

3、r-Miner軟件對得到的基因拷貝數(shù)變化信息進行染色體定位。運用SAM統(tǒng)計學分析，篩選與白念珠菌耐受氧化應激密切相關(guān)的基因。通過檢索念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫對得到的各項結(jié)果進行分析總結(jié)。 結(jié)果： 通過初篩，發(fā)現(xiàn)臨床白念珠菌存在氧化應激耐受力的差異，通過各種方法的確證最終獲得了芯片雜交的實驗對象，3株過氧化氫耐受菌和3株過氧化氫敏感菌。 芯片雜交聚類結(jié)果顯示，對氧化應激耐受性不同的白念珠菌分別屬于不同的聚類，從而確信了白

4、念珠菌對氧化應激的耐受性具有一定的基因組特征。通過SAM篩選獲得122個差異基因，其中多個線粒體相關(guān)基因在耐受過氧化氫菌株中高拷貝。白念珠菌生長狀態(tài)實驗結(jié)果，沒有看到生長狀態(tài)與氧化應激間的關(guān)系。通過對得到的基因拷貝數(shù)變化信息進行染色體定位，初步確定了兩個差異片段，一個位于白念珠菌4號染色體，一個位于白念珠菌R染色體。實時定量PCR驗證結(jié)果顯示，4號染色體上的差異片段有兩個相鄰基因同時缺失。 結(jié)論： 通過微陣列比較基因組雜