氧化苦參堿對(duì)小鼠樹突狀細(xì)胞成熟和功能的影響.pdf

1、【目的】研究氧化苦參堿對(duì)小鼠樹突狀細(xì)胞成熟、表型及功能的影響。 【方法與分組】采用細(xì)胞因子小鼠集落刺激因子(mGM-CSF)和白介素4(mIL-4)聯(lián)合方案體外誘導(dǎo)小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell，DC)，并利用脂多糖(LPS)刺激樹突狀細(xì)胞的成熟。處理組分別于樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)的第0天和第5天添加終濃度為0.5mg/ml氧化苦參堿(OMT)，并于培養(yǎng)第7天收集細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組為A組：DC；B組：DC+OMT

2、(DO)；C組：DC+OMT(D5)；D組：DC+LPS；E組：DC+OMT(D0)+LPS；F組：DC+OMT(D5)+LPS；G組：T淋巴細(xì)胞對(duì)照組。 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面分子CD40的表達(dá)；3H-TdR摻入細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測(cè)氧化苦參堿對(duì)樹突狀細(xì)胞的細(xì)胞毒作用和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)中樹突狀細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞的刺激能力；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)檢測(cè)MLR上清中IFN-γ的分泌水平。 【結(jié)果】

3、 1．3H-TdR細(xì)胞摻入試驗(yàn)檢測(cè)氧化苦參堿對(duì)小鼠樹突狀細(xì)胞存活的抑制作用。結(jié)果氧化苦參堿在濃度為0.8 mg/ml時(shí)即表現(xiàn)出抑制小鼠樹突狀細(xì)胞的作用(P 0.05)，在1.0mg/ml-5.0mg/ml濃度范圍內(nèi)，氧化苦參堿抑制樹突狀細(xì)胞增殖作用呈劑量依賴性，與對(duì)照組相比均具有顯著性差異(P 0.01)。 2．樹突狀細(xì)胞表面標(biāo)志CD40的表達(dá)：①B組DC表面分子CD40的表達(dá)[(40.77±1.28)％]較之對(duì)照A組[(25.

4、93±7.85)％]顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；C組DC表面分子CD40的表達(dá)[(26.40±4.85)％]較之對(duì)照A組，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②E組DC表面分子CD40的表達(dá)[(48.62±2.46)％]較之對(duì)照D組[(34.92±5.82)％]升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 3．混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：①各組DC與T細(xì)胞以1:5、1:10和1:20比例混合時(shí)T細(xì)胞的增殖較T細(xì)胞對(duì)照組(即G組)均明顯增高(P0.05)；隨

5、混合比例增加，T細(xì)胞增殖也增高。②DC:T為1:5時(shí)，B組T細(xì)胞的增殖[(49094.67±3048.50)cpm]較之A組[(26628.67±4268.55)cpm]升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)；C組[(27195.00±9607.25)cpm]較之對(duì)照A組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。③E組T細(xì)胞的增殖[(149144.30±7212.92)cpm]較之對(duì)照D組[(120832.30±6825.45)cpm]升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05

6、)；F組[(89665.33±7420.14)cpm]較之對(duì)照D組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4．細(xì)胞因子檢測(cè)：①各干預(yù)組較T細(xì)胞對(duì)照組上清中IFN-γ[(4.11±2.51)pg/ml]均有增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。②B組上清中IFN-γ[(181.84±33.16)pg/ml]較之對(duì)照A組[(100.88±8.51)pg/ml]高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，C組[(98.40±31.19)pg/ml]較之對(duì)照A組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)