脫酚棉籽蛋白對雞蛋品質(zhì)的影響及其機(jī)理.pdf

1、近年來，隨著大豆對外依存度的增加，價格穩(wěn)定性變差，營養(yǎng)學(xué)家試圖通過各種營養(yǎng)調(diào)控手段，加大對雜粕資源的利用。作為一種新型粕類蛋白，脫酚棉籽蛋白（Low Gossypol Cottonseed Meal，LCSM）具有低棉酚和高蛋白的特點，質(zhì)量好于傳統(tǒng)棉粕，但其在蛋雞日糧中適宜使用比例、對蛋雞和雞蛋的影響及其機(jī)理鮮有報道。本文采用飼養(yǎng)試驗、蛋品質(zhì)和血液生化測定、iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)、組織學(xué)、雙向凝膠電泳結(jié)合基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜分

2、析等方法，研究了LCSM對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、、器官組織學(xué)、血液生化和蛋清蛋白相對含量等的影響。開展本項目研究，可以厘清棉籽蛋白的特點，有利于充分利用我國豐富的棉籽資源，拓寬棉籽蛋白的應(yīng)用領(lǐng)域。
　　試驗一不同日糧蛋白水平脫酚棉籽蛋白對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響
　　本試驗觀察了不同蛋白水平下，日糧 LCSM對蛋雞生產(chǎn)性能及其蛋品質(zhì)的影響，確定添加LCSM時，適宜的飼糧粗蛋白水平。選擇40 WK健康海蘭褐產(chǎn)蛋雞432只，

3、隨機(jī)分為6個處理，每個處理6個重復(fù)，每重復(fù)12羽，分別采食以等能、相同理想氨基酸模式配制的3個蛋白水平（CP17.5％、16%和14.5%）的玉米-豆粕（SBM）或玉米-脫酚棉籽蛋白日糧，預(yù)飼期1周，正飼期12周。試驗期間，每天記錄蛋重、耗料量，計算料蛋比等生產(chǎn)性能指標(biāo)。每隔6周，每重復(fù)收集5枚雞蛋，測定蛋品質(zhì)（蛋白高度、哈氏單位（HU）、蛋殼強(qiáng)度、厚度、蛋黃重和蛋黃顏色）。結(jié)果表明，試驗全期，LCSM未顯著影響蛋殼厚度、強(qiáng)度、蛋黃顏色

4、和蛋黃重；提示，LCSM不影響蛋殼和蛋黃品質(zhì)。與SBM組相比，在40～45 WK沒有顯著影響，但46～51 WK，不同蛋白水平下，LCSM對蛋雞采食量、蛋重和蛋清品質(zhì)影響顯著（P<0.05）。日糧CP14.5%，全棉籽蛋白和全豆粕日糧，未見顯著影響蛋雞生產(chǎn)性能；日糧 CP16%和17.5%時，與全豆粕組相比，在46～51 WK，LCSM組的蛋雞采食量和蛋重均顯著降低（P<0.05）。日糧CP16%，LCSM組雞蛋蛋白高度顯著降低（P<0

5、.05）。全豆粕型日糧，與CP17.5%組相比，CP14.5%組的蛋重和蛋白高度顯著降低（P<0.05）。全棉籽蛋白組和全豆粕組中，與CP17.5%組相比，CP16%和14.5%組的飼料/雞蛋最低，但CP14.5%組中蛋白高度和HU顯著降低。因此，在使用脫酚棉籽蛋白時，日糧蛋白水平適宜采用16%；LCSM日糧飼喂蛋雞6周未見顯著影響生產(chǎn)性能，12周引起了生產(chǎn)性能和蛋清品質(zhì)的下降，提示LCSM對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能有累積致毒作用。
　　試

6、驗二脫酚棉籽蛋白對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響
　　本試驗研究了日糧中添加的LCSM，對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響，以確定LCSM的適宜添加水平。選擇432只40 WK健康海蘭褐產(chǎn)蛋雞，隨機(jī)分為6個處理，每個處理6個重復(fù)，每重復(fù)12羽雞，分別采食等能、相同理想氨基酸模式的6種日糧（CP16%）。對照組為玉米豆粕基礎(chǔ)日糧，4個組（LCSM25、LCSM50、LCSM75和 LCSM100）分別按25%、50%、75%和100%替代對照

7、組中由豆粕提供的蛋白（添加50、98.3、144.2和189 g/kg LCSM），第6組在對照組日糧中添加和LCSM100組含量相同的游離棉酚（28.35 mg/kg）。預(yù)飼期1周，正飼期12周。試驗期間，每天記錄蛋重、耗料量，計算料蛋比等生產(chǎn)性能指標(biāo)。每隔6周，每個重復(fù)收集5枚雞蛋，測定蛋品質(zhì)及蛋清蛋白含量。研究表明，LCSM100組46～51 WK蛋雞采食量和蛋重顯著降低(P<0.05)，全期，LCSM對蛋雞產(chǎn)蛋率和料蛋比沒有顯著

8、影響（P>0.05）。試驗全期，各處理組蛋黃顏色沒有顯著變化，但與豆粕組相比，LCSM100組46～51 WK雞蛋HU、蛋白高度和蛋清蛋白含量顯著降低(P<0.05)。與對照組相比，LCSM組的血漿總蛋白、尿素氮、尿酸、血清蛋白、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶沒有顯著變化；肝腎切片組織學(xué)未見病變。LCSM100顯著降低了蛋雞采食量、蛋重及蛋清指標(biāo)；然而，與豆粕組相比，添加棉酚組中各指標(biāo)未見顯著降低。因此，這種負(fù)面影響并非由其中棉酚引起；蛋

9、雞日糧中LCSM適宜添加98.3 g/kg。
　　試驗三脫酚棉籽蛋白對蛋清中蛋白質(zhì)組成的影響
　　本試驗研究了LCSM引起的蛋清品質(zhì)下降與蛋清中蛋白質(zhì)相對含量之間的關(guān)系。將40 WK、216只海蘭褐產(chǎn)蛋雞分為3個組，對照組飼喂玉米-豆粕基礎(chǔ)日糧（SBM組），另兩組分別由LCSM替代對照組日糧中豆粕提供的50%（LCSM50）和100%蛋白（LCSM100）。試驗期12周。試驗期間，觀測和記錄蛋清、血液激素，觀察輸卵管組織學(xué)，

10、采用iTRAQ技術(shù)研究飼喂LCSM后蛋清蛋白相對含量的差異。與SBM組相比，LCSM100組蛋清中有15種蛋白相對含量顯著降低，分別為：卵清蛋白（Ovalbumin）、卵轉(zhuǎn)運(yùn)鐵蛋白(Ovotransferrin)、卵粘蛋白(Ovomucin)、溶菌酶蛋白(Lysozyme)、卵抑制劑(Ovoinhibitor)和簇蛋白(Clusterin)等。這些降低的蛋白占蛋清總蛋白的75%，均具有抗菌、抗病毒性，在蛋清的保護(hù)機(jī)制上發(fā)揮重要作用。卵粘

11、蛋白影響蛋清粘度系數(shù)和抗蛋清稀化；簇蛋白影響蛋清中折疊蛋白的穩(wěn)定和抗蛋白沉淀。飼喂LCSM后引起的這些蛋白的降低，造成了蛋白高度和HU的降低。LCSM100組血漿孕酮水平的下降在一定程度抑制了輸卵管中管狀腺細(xì)胞和上皮細(xì)胞的生長，降低了該部位分泌蛋清蛋白的功能。分子水平上蛋清各蛋白的相對含量的下降闡釋了其生化水平上各指標(biāo)的下降，從分子水平說明了LCSM在蛋雞日糧中不能100%替代豆粕。
　　試驗四脫酚棉籽蛋白對儲存期雞蛋蛋品質(zhì)及蛋清

12、中蛋白質(zhì)組成的影響
　　本試驗研究了LCSM對儲存期蛋品質(zhì)的影響及其機(jī)理。在飼養(yǎng)試驗的12周末的連續(xù)三天內(nèi)采集SBM、LCSM50和LCSM100組蛋樣總共540枚，分別儲存于4℃，相對濕度65%下4和8周，測定0、4和8周的HU、蛋白pH、蛋黃指數(shù)；采用二維雙向凝膠電泳（2-DE）結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOF MS），分析儲存8周后SBM組和LCSM100組其蛋清蛋白的相對含量差異。結(jié)果顯示

13、，儲存時間顯著影響雞蛋 HU，隨儲存時間的延長 HU顯著降低（P<0.05）。與SBM組相比，LCSM100組HU低于SBM和LCSM50組（P<0.05），雞蛋蛋清pH顯著高于SBM和LCSM50組的雞蛋蛋清pH（P<0.05）。儲存期內(nèi)，飼糧蛋白源顯著影響雞蛋蛋黃指數(shù)（P<0.05），LCSM50組的蛋黃指數(shù)與 SBM組無顯著差異，但 LCSM100組低于LCSM50和SBM組（P<0.05）。LCSM50組的蛋清品質(zhì)與SBM組的蛋

14、清品質(zhì)相當(dāng)。2-DE鑒定結(jié)果顯示儲存8周后 SBM組由于儲存時間的蛋清稀化作用有18個蛋白相對含量下降，而 LCSM100組中有36個蛋白相對含量上升，相比于上一章中iTRAQ鑒定的LCSM100組中下降的15個蛋白數(shù)相比，其儲存期下降蛋白增加了140%，說明LCSM100組的雞蛋在儲存期其蛋品質(zhì)更易趨于降低。LCSM100組的雞蛋由于其蛋清蛋白模式的改變在儲存期不僅蛋清品質(zhì)進(jìn)一步降低，且蛋黃指數(shù)也顯著下降，在整個試驗期內(nèi)，LCSM50