絲裂霉素術(shù)中腹腔溫?zé)峄煂istar大鼠結(jié)腸吻合口血管生成的影響研究.pdf

1、人類試圖用化學(xué)藥物治療癌癥由來己久，而從60年代以后，才真正地建立起了比較完善的研究和使用體系。目前有不少癌癥可以通過化學(xué)藥物治愈，而腫瘤的治療是一種綜合治療，所以要將腫瘤的治療學(xué)掌握好、應(yīng)用好需要更多方面的知識和經(jīng)驗(yàn)。隨著腫瘤治療研究的發(fā)展，腫瘤臨床治療的方法也日趨多樣化。術(shù)中腹腔溫?zé)峄烮PHC(新輔助療法)是八十年代才發(fā)展起來的一種治療腫瘤的新方法，是腹腔化療與局部熱療相結(jié)合的一種外科減瘤術(shù)后的局部輔助療法，在殺滅腹腔內(nèi)游離的腫瘤

2、細(xì)胞和微小癌轉(zhuǎn)移灶，預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)，提高術(shù)后生存率等方面優(yōu)于傳統(tǒng)療法。然而，術(shù)中腹腔溫?zé)峄熢趯δ[瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用的同時，也會對正常細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，這種作用在吻合口部位表現(xiàn)的更為明顯。眾所周知，新生血管對傷后愈合起著至關(guān)重要的作用，本課題旨在通過研究運(yùn)用絲裂霉素行術(shù)中腹腔溫?zé)峄煂istar大鼠結(jié)腸腸吻合口新生血管生成的影響及機(jī)制，以此來探討術(shù)中腹腔溫?zé)峄煹陌踩院涂尚行浴?方法： 健康大鼠54只行左半結(jié)腸離斷

3、，斷端端端吻合術(shù)后隨機(jī)分為3組，每組18只，處置如下：A：37℃常溫灌注組(IPNP組)；B：43℃溫?zé)峁嘧⒔M(IPHP組)；C：43℃溫?zé)峄熃M(IPHC組)，化療藥物為絲裂霉素8mg/L。分別于術(shù)后第1，3，5，7，14，28天切取吻合口周圍結(jié)腸，行HE及VEGF免疫組化染色、MVD計數(shù)、RT-PCR法檢測血管內(nèi)皮生長因子mRNA的相對表達(dá)量；采用單因素方差分析及Pearson相關(guān)分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。

4、 結(jié)果： 1．HE染色病理觀察示常溫組于術(shù)后1天新生毛細(xì)血管即見增多，3天毛細(xì)血管明顯增多，術(shù)后5天毛細(xì)血管數(shù)量達(dá)高峰，7-28天逐漸減少、閉合、退化，溫?zé)峤M變化與常溫組變化趨于一致。溫?zé)峄熃M于術(shù)后5天始見增多，14天達(dá)高峰，術(shù)后28天基本趨于基線水平。 2．免疫組化染色病理觀察示VEGF蛋白在正常結(jié)腸吻合口周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和部分炎細(xì)胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達(dá)。常溫組血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿vEGF蛋白表達(dá)在傷后第1天呈陽

5、性，傷后5天成強(qiáng)陽性，而于傷后7天陽性程度逐漸減弱，溫?zé)峤M與常溫組變化趨于一致。與上述兩組相比，溫?zé)峄熃M血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿VEGF蛋白表達(dá)在傷后3天部分成陽性、部分成弱陽性，傷后5、7天成強(qiáng)陽性，傷后14天成陽性，28天于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)呈弱陽性。 3．常溫組與溫?zé)峤M動物微血管密度(MVD)隨時間變化趨勢基本趨于一致，均于術(shù)后1天即明顯增多，5天達(dá)峰值并維持在較高水平，7天開始逐漸減少，28天降至較低水平。溫?zé)峄熃MMVD變化

6、趨于平緩，術(shù)后早期計數(shù)變化不顯著，3天后逐漸升高，術(shù)后第14天達(dá)高峰，隨即減少，28天降至較低水平。溫?zé)峤M與常溫組比較MVD僅于第1天存在顯著差異，其它各時間段均無顯著差異。溫?zé)峄熃M與常溫組比較除第7、28天外各時間段均存在顯著差異。 4．各實(shí)驗(yàn)組VEGF-mRNA相對表達(dá)量與MVD呈平行變化。隨MVD的增加，vEGF-mRNA相對表達(dá)量亦增高。經(jīng)單因素方差分析溫?zé)峤M與常溫組比較VEGF-mRNA相對表達(dá)量僅于術(shù)后第l天存在顯

7、著差異，其它各時間段均無顯著差異。溫?zé)峄熍c常溫組比較除第7、28天外各時間段均存在顯著差異。經(jīng)Pearson相關(guān)分析，VEGF表達(dá)強(qiáng)度與MVD間有顯著相關(guān)性(r<,1>=0.92 p<,1><0.01，r<,2>=0.97p2<0.01， r<,3>=0.94 p3<0.01)。 結(jié)論： 1．溫?zé)嵝?yīng)對結(jié)腸吻合口新生血管生成存有不利影響，但此影響僅局限于術(shù)后早期。溫?zé)嵝?yīng)聯(lián)合使用MMC行IPHC對新生血管生成的影響明顯

8、，其協(xié)同的影響作用表現(xiàn)的顯著而持久。 2．術(shù)后第7天各組實(shí)驗(yàn)動物吻合口周圍新生血管均增值到一較高水平，且無統(tǒng)計學(xué)差異，可被認(rèn)為是吻合口愈合的關(guān)鍵時期。 3．VEGF對血管內(nèi)皮細(xì)胞有特異的促有絲分裂作用，是有效的內(nèi)源性大鼠結(jié)腸血管生長因子。在結(jié)腸吻合術(shù)后，VEGF與結(jié)腸吻合口新生血管生成有時間上的相關(guān)性，并在其中發(fā)揮重要作用。 4．溫?zé)嵝?yīng)聯(lián)合使用MMC行IPHC在分子水平上即影響了VEGF的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)，以此進(jìn)一步