絲裂霉素對(duì)短期體外大鼠胰島分泌功能影響的初步研究.pdf

1、目的:隨著社會(huì)的發(fā)展,生活方式及環(huán)境等因素的改變,惡性腫瘤發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì),惡性腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病;而糖尿病患病率明顯上升?；熓悄壳爸委煇盒阅[瘤的主要手段之一,隨著腫瘤晚期患者經(jīng)化療生存期的延長(zhǎng),抗腫瘤藥物引發(fā)的毒副作用的預(yù)防及引起的有關(guān)疾病的治療引起了越來(lái)越多的關(guān)注和研究。國(guó)內(nèi)外有多項(xiàng)研究表明在化療過(guò)程中及化療結(jié)束后,新發(fā)糖尿病病人患病率增加,化療前己存在糖耐量異?；蛱悄虿〉牟∪瞬∏榧又?因此許多學(xué)者提出化療藥物

2、可能會(huì)直接損傷胰島細(xì)胞功能,從而引發(fā)糖耐量異常甚至糖尿病。但多為回顧性研究,少部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究經(jīng)靜脈、腹腔注射化療藥物等多種給藥途徑測(cè)定靜脈血糖及胰島素分泌水平,但是上述研究均存在過(guò)多的干擾因素,如:腎上腺皮質(zhì)激素、巨噬細(xì)胞集落刺激因子的應(yīng)用、胰島素抵抗等,尚缺少化療藥物對(duì)體外原代培養(yǎng)的胰島細(xì)胞功能影響的證據(jù)。絲裂霉素是臨床上常用的化療藥物之一,用于多種腫瘤、的化療。目前我們前期試驗(yàn)進(jìn)行了動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)研究證實(shí)絲裂霉素可損傷胰島細(xì)胞功能,

3、本研究采用對(duì)短期正常飼養(yǎng)的Wistar大鼠剖腹提取胰腺,并經(jīng)消化、離心等一系列步驟后,針對(duì)提純的胰島細(xì)胞應(yīng)用不同濃度的絲裂霉素進(jìn)行處理,觀察化療藥物對(duì)胰島素分泌及胰島細(xì)胞凋亡的影響,從而為臨床上指導(dǎo)化療期間患者的血糖監(jiān)測(cè)和飲食提供理論依據(jù)。
　　 方法:健康Wistar雄性大鼠25只,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天禁食10h后,腹腔麻醉無(wú)菌條件下,運(yùn)用膠原酶V膽胰管原位灌注法分離胰腺,經(jīng)37℃水浴恒溫震蕩消化,Ficoll400純化胰島,后運(yùn)用

4、解剖顯微鏡觀察并挑取正常胰島,將大小相似的胰島每5個(gè)一組分組均于RPMI1640(10％胎牛血清)培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)1h。后胰島按照組別分別置于RPMI1640(10％胎牛血清)培養(yǎng)基、含不同濃度絲裂霉素的培養(yǎng)基中分別進(jìn)行1h、6h、12h、24h37℃恒溫培養(yǎng)。隨后各組胰島按照時(shí)間先后順序分別置于KRBH(葡萄糖濃度:3mmol/L)溶液、KRBH(葡萄糖濃度:15mmol/L)溶液中培養(yǎng)1h,收集培養(yǎng)液上清,20℃保存,用于測(cè)定基

5、礎(chǔ)胰島素及葡萄糖刺激后胰島素水平,收集胰島,-80℃保存,用于測(cè)定胰島DNA水平。
　　 1胰島素的測(cè)定
　　 胰島素采用放射免疫法測(cè)定。
　　 2胰島細(xì)胞DNA測(cè)定
　　 胰島細(xì)胞DNA采用吸附離心法提取,紫外線光吸收度法測(cè)定,反應(yīng)胰島細(xì)胞數(shù)目情況。胰島素與胰島細(xì)胞DNA比值=胰島素/胰島細(xì)胞DNA的測(cè)定用于評(píng)價(jià)胰島細(xì)胞功能狀態(tài)。
　　 結(jié)果:
　　 1各大鼠之間體重的比較
　　

6、 實(shí)驗(yàn)開始時(shí),大鼠隨機(jī)分組,各組大鼠體重比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),有可比性。大鼠取材前各組大鼠體重比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P＞0.05)。
　　 2各組胰島DNA結(jié)果
　　 各組胰島培養(yǎng)1h、6h、12h后,低糖環(huán)境下,各組DNA比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,各組DNA比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 各組胰島培養(yǎng)24h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL

7、絲裂霉素組DNA低于0.01mg/mL、0.032mg/mL,絲裂霉素組及對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間DNA比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組DNA低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組間DNA比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 在絲裂霉素濃度相同的情況下,低糖環(huán)境下,各胰島DNA比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下

8、,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島培養(yǎng)24hDNA低于培養(yǎng)1h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余組DNA比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3各組胰島胰島素與胰島DNA比值結(jié)果
　　 各組胰島培養(yǎng)1h、6h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素

9、組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 各組胰島培養(yǎng)12h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),0.1mg/mL

10、絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于0.01mg/mL絲裂霉素組及對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 各組胰島培養(yǎng)24h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),0.1mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于0.01mg/mL、0.032mg/mL,絲裂霉素組及對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0

11、5),其余各組之間比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),0.1mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于0.01mg/mL、0.032mg/mL絲裂霉素組及對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間的比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 對(duì)照組、0.01mg/mL、0.032mg/mL絲裂霉素組胰

12、島,低糖環(huán)境下,各組胰島素與胰島DNA比值比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,各組胰島素與胰島DNA比值比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 0.1mg/mL絲裂霉素組胰島,低糖環(huán)境下,各組胰島素與胰島DNA比值比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,培養(yǎng)24h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間的比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

13、r>　　 0.32mg/mL絲裂霉素組胰島,低糖環(huán)境下,培養(yǎng)24h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h、6h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間的比較無(wú)差別,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高糖環(huán)境下,培養(yǎng)24h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h、6h、12h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),培養(yǎng)12h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h、6h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),培養(yǎng)6h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

14、＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1在普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的大鼠胰島細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的逐漸延長(zhǎng)至24h,基礎(chǔ)胰島素及高葡萄糖刺激胰島素分泌無(wú)明顯變化,絲裂霉素對(duì)胰島細(xì)胞有直接毒性作用,使胰島素分泌減少。
　　 2低、中濃度(0.032mg/mL)絲裂霉素對(duì)大鼠胰島細(xì)胞胰島素的分泌無(wú)明顯影響,隨著絲裂霉素濃度的增加,培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠胰島細(xì)胞基礎(chǔ)胰島素及高葡萄糖刺激的胰島素分泌能力均下降,高葡萄糖刺激的胰島素分泌下降