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文檔簡介
1、目的:隨著社會的發(fā)展,生活方式及環(huán)境等因素的改變,惡性腫瘤發(fā)病率有逐年增加的趨勢,惡性腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病;而糖尿病患病率明顯上升?;熓悄壳爸委煇盒阅[瘤的主要手段之一,隨著腫瘤晚期患者經(jīng)化療生存期的延長,抗腫瘤藥物引發(fā)的毒副作用的預(yù)防及引起的有關(guān)疾病的治療引起了越來越多的關(guān)注和研究。國內(nèi)外有多項研究表明在化療過程中及化療結(jié)束后,新發(fā)糖尿病病人患病率增加,化療前己存在糖耐量異?;蛱悄虿〉牟∪瞬∏榧又?因此許多學(xué)者提出化療藥物
2、可能會直接損傷胰島細胞功能,從而引發(fā)糖耐量異常甚至糖尿病。但多為回顧性研究,少部分動物實驗研究經(jīng)靜脈、腹腔注射化療藥物等多種給藥途徑測定靜脈血糖及胰島素分泌水平,但是上述研究均存在過多的干擾因素,如:腎上腺皮質(zhì)激素、巨噬細胞集落刺激因子的應(yīng)用、胰島素抵抗等,尚缺少化療藥物對體外原代培養(yǎng)的胰島細胞功能影響的證據(jù)。絲裂霉素是臨床上常用的化療藥物之一,用于多種腫瘤、的化療。目前我們前期試驗進行了動物體內(nèi)試驗研究證實絲裂霉素可損傷胰島細胞功能,
3、本研究采用對短期正常飼養(yǎng)的Wistar大鼠剖腹提取胰腺,并經(jīng)消化、離心等一系列步驟后,針對提純的胰島細胞應(yīng)用不同濃度的絲裂霉素進行處理,觀察化療藥物對胰島素分泌及胰島細胞凋亡的影響,從而為臨床上指導(dǎo)化療期間患者的血糖監(jiān)測和飲食提供理論依據(jù)。
方法:健康Wistar雄性大鼠25只,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天禁食10h后,腹腔麻醉無菌條件下,運用膠原酶V膽胰管原位灌注法分離胰腺,經(jīng)37℃水浴恒溫震蕩消化,Ficoll400純化胰島,后運用
4、解剖顯微鏡觀察并挑取正常胰島,將大小相似的胰島每5個一組分組均于RPMI1640(10%胎牛血清)培養(yǎng)基37℃恒溫培養(yǎng)1h。后胰島按照組別分別置于RPMI1640(10%胎牛血清)培養(yǎng)基、含不同濃度絲裂霉素的培養(yǎng)基中分別進行1h、6h、12h、24h37℃恒溫培養(yǎng)。隨后各組胰島按照時間先后順序分別置于KRBH(葡萄糖濃度:3mmol/L)溶液、KRBH(葡萄糖濃度:15mmol/L)溶液中培養(yǎng)1h,收集培養(yǎng)液上清,20℃保存,用于測定基
5、礎(chǔ)胰島素及葡萄糖刺激后胰島素水平,收集胰島,-80℃保存,用于測定胰島DNA水平。
1胰島素的測定
胰島素采用放射免疫法測定。
2胰島細胞DNA測定
胰島細胞DNA采用吸附離心法提取,紫外線光吸收度法測定,反應(yīng)胰島細胞數(shù)目情況。胰島素與胰島細胞DNA比值=胰島素/胰島細胞DNA的測定用于評價胰島細胞功能狀態(tài)。
結(jié)果:
1各大鼠之間體重的比較
6、 實驗開始時,大鼠隨機分組,各組大鼠體重比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),有可比性。大鼠取材前各組大鼠體重比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義,(P>0.05)。
2各組胰島DNA結(jié)果
各組胰島培養(yǎng)1h、6h、12h后,低糖環(huán)境下,各組DNA比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,各組DNA比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
各組胰島培養(yǎng)24h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL
7、絲裂霉素組DNA低于0.01mg/mL、0.032mg/mL,絲裂霉素組及對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間DNA比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組DNA低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組間DNA比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
在絲裂霉素濃度相同的情況下,低糖環(huán)境下,各胰島DNA比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下
8、,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島培養(yǎng)24hDNA低于培養(yǎng)1h,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余組DNA比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
3各組胰島胰島素與胰島DNA比值結(jié)果
各組胰島培養(yǎng)1h、6h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素
9、組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
各組胰島培養(yǎng)12h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),0.1mg/mL
10、絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于0.01mg/mL絲裂霉素組及對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
各組胰島培養(yǎng)24h后,低糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),0.1mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于0.01mg/mL、0.032mg/mL,絲裂霉素組及對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0
11、5),其余各組之間比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,0.32mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于其余各組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),0.1mg/mL絲裂霉素組胰島素與胰島DNA比值低于0.01mg/mL、0.032mg/mL絲裂霉素組及對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間的比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
對照組、0.01mg/mL、0.032mg/mL絲裂霉素組胰
12、島,低糖環(huán)境下,各組胰島素與胰島DNA比值比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,各組胰島素與胰島DNA比值比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
0.1mg/mL絲裂霉素組胰島,低糖環(huán)境下,各組胰島素與胰島DNA比值比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,培養(yǎng)24h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間的比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
13、r> 0.32mg/mL絲裂霉素組胰島,低糖環(huán)境下,培養(yǎng)24h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h、6h,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組之間的比較無差別,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高糖環(huán)境下,培養(yǎng)24h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h、6h、12h,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),培養(yǎng)12h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h、6h,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),培養(yǎng)6h胰島素與胰島DNA比值低于培養(yǎng)1h,有統(tǒng)計學(xué)意義(P
14、<0.05)。
結(jié)論:
1在普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的大鼠胰島細胞隨著培養(yǎng)時間的逐漸延長至24h,基礎(chǔ)胰島素及高葡萄糖刺激胰島素分泌無明顯變化,絲裂霉素對胰島細胞有直接毒性作用,使胰島素分泌減少。
2低、中濃度(0.032mg/mL)絲裂霉素對大鼠胰島細胞胰島素的分泌無明顯影響,隨著絲裂霉素濃度的增加,培養(yǎng)時間的延長,大鼠胰島細胞基礎(chǔ)胰島素及高葡萄糖刺激的胰島素分泌能力均下降,高葡萄糖刺激的胰島素分泌下降
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