內(nèi)皮素-1在門脈高壓血管病變發(fā)病中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:了解內(nèi)皮素(ET-1)在門脈高壓大鼠模型中對轉(zhuǎn)移生長因子(TGF-β)、核轉(zhuǎn)錄因子kappa-β(NF-к B)蛋白的表達(dá)及分布，ET-1對血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA表達(dá)及分布的影響，闡明ET-1在門脈高壓血管病變發(fā)病中的作用機(jī)制。 方法:制備門靜脈部分結(jié)扎門脈高壓大鼠模型，應(yīng)用ET-1受體拮抗劑Bosentan，采用放射免疫法測定循環(huán)血液中ET-1濃度；對組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色，觀察病理變化：應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢

2、測內(nèi)臟血管組織中TGF-β、NF-к B蛋白表達(dá)及分布情況：采用原位雜交技術(shù)檢測內(nèi)臟血管組織中VEGFmRNA表達(dá)及分布情況；并對上述結(jié)果進(jìn)行圖像分析。 結(jié)果: 一．血清ET濃度的檢測結(jié)果： 正常對照組(SO組)ET-1濃度為：142.39±5.02pg/ml，門脈高壓組(PH組)ET-1濃度(211.56±5.98 pg/ml)明顯高于SO組，與SO組相比有顯著性差異(p<0.05)。Bosentan組為：21

3、6.20±4.48 pg/ml，與PH組相比差異無顯著性(p>0.05)。說明藥物Bosentan不會影響血清ET-1濃度。 二．光鏡觀察結(jié)果： PH手術(shù)組：門靜脈內(nèi)膜增厚，內(nèi)含增生的膠原纖維和大量方向不一的平滑肌，中膜層顯著增厚，肌纖維增粗，致密，外膜層有炎細(xì)胞浸潤。應(yīng)用ET-1受體拮抗劑Bosentan后，血管病變程度減輕。 三．免疫組化檢測結(jié)果： (一)TGF-β蛋白表達(dá)： SO組僅有少量TGF-

4、β蛋白的表達(dá)，PH組TGF-β蛋白的表達(dá)量明顯增高，圖像分析結(jié)果顯示：PH組的積分光密度(1718.5±27.93)及陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)(6.61±0.15)均明顯高于SO組(積分光密度765.12±15.61，陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)1.22±0.05)，差異有顯著性(p<0.05)。Bosentan降低了TGF-β蛋白的表達(dá)，Bosentan組的積分光密度(1416.6±21.68)及陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)(5.22±0.25)與PH組相比差異均有顯著性

5、(p<0.05)。 (二)NF-kB蛋白表達(dá)：圖像分析結(jié)果顯示，PH組的積分光密度(1836.40±33.11)及陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)(9.29±0.36)明顯高于SO組的積分光密度(599.60±18.99)及陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)(1.01±0.05)，差異有顯著性(p<0.05)。Bosentan組的積分光密度(960.73±21.61)及陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)(6.49±0.21)均明顯低于PH組，差異有顯著性(p<0.05)。 四．

6、原位雜交檢測結(jié)果：VEGFmRNA陽性信號為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞漿。SO組僅有少量VEGFmRNA的表達(dá)，PH組VEGFmRNA的表達(dá)量明顯增高，圖像分析結(jié)果顯示：PH組的積分光密度(1706.20±34.23)及陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)(8.71±0.58)均明顯高于SO組(積分光密度為771.22±19.84，陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)為1.52±0.14)，差異有顯著性(p<0.05)。Bosentan組VEGFmRNA的表達(dá)量明顯下降，積分光密度為