川芎組織培養(yǎng)及不同抗生素種類和濃度對(duì)川芎培養(yǎng)影響的研究.pdf

1、傘形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)是我國(guó)四川省著名的道地中藥材。川芎在全國(guó)有著較為廣泛的分布，主產(chǎn)四川省都江堰市。川芎以其干燥的根狀莖入藥，在臨床上可用于治療多種疾病。川芎的根狀莖中富含大量的藥用成份，而在川芎的代用品研究中證實(shí)，川芎根中揮發(fā)油含量及有效成份與根狀莖基本相同。故以其根為外植體誘導(dǎo)生成的愈傷組織中也很有可能含有藥用有效成分，在生產(chǎn)和臨床上可能有一定的參考價(jià)值。 本實(shí)驗(yàn)以川芎的根

2、為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，通過器官發(fā)生途徑獲得了大量的組培苗。川芎根的愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6 BA 0.8 mg/L(單位下同)+NAA 1.2；根愈傷組織分化不定芽的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.2+IAA0.3；生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 1.0+NAA 0.7。以川芎根為外植體誘導(dǎo)出的愈傷組織中是否含有藥用成份，還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探索和證實(shí)。 在組織培養(yǎng)研究中，同時(shí)以川芎的莖段和葉片為外植體作為對(duì)照。

3、 因?yàn)樵诖ㄜ航M織培養(yǎng)過程中很容易出現(xiàn)黃化苗和玻璃苗，故在實(shí)驗(yàn)中篩選出壯苗培養(yǎng)基(MS+GA<,3>，1.2+6-BA 1.8+IAA 0.3)，可以使小苗在較短時(shí)間內(nèi)(14d左右)成長(zhǎng)健壯，并且使黃化苗和玻璃苗的發(fā)生率大大降低。 以上培養(yǎng)基均選用pH 5.8，瓊脂0.6％～0.7％。經(jīng)過煉苗后，組培苗移栽成活率達(dá)98％。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法進(jìn)行植物遺傳轉(zhuǎn)化的研究中，抗生素種類和濃度的選擇是獲得轉(zhuǎn)化植株的一個(gè)重要前提。植物轉(zhuǎn)基

4、因中常用的抗生素根據(jù)其用途分為兩大類：一類是抑菌劑，用于植物受體材料感染農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后的脫菌(去除農(nóng)桿菌)和防止雜菌污染；另一類是選擇劑，用于篩選轉(zhuǎn)化體和檢測(cè)轉(zhuǎn)基因后代。 本實(shí)驗(yàn)以川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的根、莖段、葉片及其對(duì)應(yīng)的愈傷組織作為實(shí)驗(yàn)材料，研究了四種抗生素對(duì)其生長(zhǎng)的影響。在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度和不同種類的抗生素，比較其對(duì)川芎不同外植體及其對(duì)應(yīng)愈傷組織生長(zhǎng)的影響。方差分析和總體

5、觀察的結(jié)果表明，當(dāng)篩選轉(zhuǎn)化植株的抗生素為卡那霉素時(shí)，其最佳抗性篩選濃度為20-40mg/L；當(dāng)篩選轉(zhuǎn)化植株的抗生素為利福平時(shí)，其最佳抗性篩選濃度約為200mg/L。 氨芐青霉素和特美汀是兩種抑菌性抗生素。抑菌劑的使用原則是達(dá)到抑菌目的的同時(shí)使抗生素對(duì)植物愈傷組織形成和分化的影響最小，即盡量降低其濃度。在本實(shí)驗(yàn)中，特美汀對(duì)川芎外植體的毒害作用較大，因此不選擇它作為抑菌劑；氨芐青霉素對(duì)川芎外植體的生長(zhǎng)影響較小，因此可以考慮選擇它作為