單分子力譜研究核酸適配體與Bel-7404細(xì)胞的相互作用.pdf

1、作為一種新型的能以癌細(xì)胞為靶標(biāo)的識別分子，核酸適配體因其具有高特異性、高親和力等優(yōu)點(diǎn)已在生物傳感、診療等研究領(lǐng)域引起了關(guān)注。在這些研究中，核酸適配體通常需要被固定到一個(gè)表面上。為了確保固定化的核酸適配體探針對靶細(xì)胞的高特異性、高親和力，核酸適配體的固定化方法起著至關(guān)重要的作用。因此，有必要在活細(xì)胞水平上研究不同的固定化方法對核酸適配體與靶細(xì)胞相互作用的影響。本論文選取人肝癌細(xì)胞株Bel-7404為例，利用單分子力譜較為系統(tǒng)地研究了核酸適

2、配體的固定化方法對Bel-7404細(xì)胞與其核酸適配體ls2n相互作用的影響,并進(jìn)一步考察了重金屬離子對二者相互作用的影響。內(nèi)容包括：
　　1．利用單分子力譜研究了核酸適配體的不同固定化方法對Bel-7404細(xì)胞與其核酸適配體ls2n相互作用的影響。在近生理?xiàng)l件下，系統(tǒng)地考察了核酸適配體的不同修飾末端（3’端或5’端）、不同延長手臂（T手臂或碳鏈?zhǔn)直郏?、不同交?lián)劑的選擇（PEG或戊二醛作為交聯(lián)劑）對核酸適配體與Bel-7404細(xì)胞相

3、互作用的影響。結(jié)果表明：(1)與核酸適配體的3’端作為修飾末端相比，核酸適配體的5’端作為修飾末端時(shí)核酸適配體與Bel-7404細(xì)胞相互作用的結(jié)合幾率更高，說明5’端作為修飾末端更有利于核酸適配體與Bel-7404細(xì)胞結(jié)合；（2）與未延長手臂相比，延長T堿基作為手臂均能明顯提高核酸適配體對Bel-7404細(xì)胞的識別能力。但是延長碳鏈作為手臂時(shí)，僅能略微提高以戊二醛作為交聯(lián)劑時(shí)的核酸適配體與 Bel-7404細(xì)胞相互作用的結(jié)合幾率，而對以

4、 PEG作為交聯(lián)劑時(shí)的二者相互作用的結(jié)合幾率幾乎沒有影響，因此 T手臂比碳鏈?zhǔn)直鄹行?；?）與以戊二醛為交聯(lián)劑時(shí)相比，以 PEG作為交聯(lián)劑時(shí)核酸適配體與 Bel-7404細(xì)胞相互作用的結(jié)合幾率更高。因此，PEG修飾方法比戊二醛修飾方法更優(yōu)。該研究將為基于核酸適配體的化學(xué)生物傳感設(shè)計(jì)提供重要參考。
　　2．利用單分子力譜研究了重金屬離子Cd2+、Hg2+對核酸適配體ls2n與Bel-7404細(xì)胞相互作用的影響。當(dāng) Bel-7404

5、細(xì)胞經(jīng)不同濃度的Cd2+或 Hg2+處理后，考察了核酸適配體與Bel-7404細(xì)胞的相互作用情況。結(jié)果表明，隨著Cd2+、Hg2+濃度的增大，核酸適配體與Bel-7404細(xì)胞的結(jié)合幾率明顯下降，但是核酸適配體與細(xì)胞的相互作用力增大。這可能是Cd2+、Hg2+影響了Bel-7404細(xì)胞的正常生理代謝，進(jìn)而影響了Bel-7404細(xì)胞上的核酸適配體相應(yīng)靶標(biāo)的正常表達(dá)；或者是Cd2+、Hg2+引起了Bel-7404細(xì)胞的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變所致。該研