微囊藻毒素致大鼠肝細(xì)胞氧化損傷機(jī)制探討及B族維生素聯(lián)合維生素C的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 應(yīng)用分子生物學(xué)的技術(shù)，探討微囊藻毒素對體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞的損傷機(jī)制，并且對抗氧化營養(yǎng)素及B族維生素對微囊藻毒素染毒所致肝細(xì)胞的損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究，為尋找肝臟保護(hù)與肝癌預(yù)防的有效方法提供參考。 方法： 1、購買BRL(大鼠肝細(xì)胞)細(xì)胞株，待增殖情況穩(wěn)定，開始試驗。 2、MC-LR染毒肝細(xì)胞，24小時后MTT法檢測細(xì)胞增殖情況。 3、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測毒素對細(xì)胞凋亡情況的影響。 4、

2、根據(jù)正交設(shè)計結(jié)果，BRL預(yù)先加入維生素作用，24小時后加入MC-LR染毒，檢測超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化酶(GSHPX)。 5、RT-PCR：結(jié)合正交設(shè)計實驗，篩選出有效的保護(hù)組合，通過逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，測定目的基因PCNA和UDG在mRNA水平上的改變。 結(jié)果： 1、與正常組細(xì)胞相比，MC-LR在濃度低于1μg/ml時，促進(jìn)BRL增殖，濃度為0.51μg/ml時，細(xì)胞增長達(dá)到峰值；MC-LR濃度高

3、于1.25μg/ml時，抑制細(xì)胞增殖。 2、MC-IR染毒BRL后，細(xì)胞凋亡發(fā)生變化，當(dāng)濃度在0.001～0.5 μg/ml范圍，凋亡率逐漸增加，1～2.5μg/ml凋亡率逐漸減少。 3、與正常組細(xì)胞相比，不同濃度MC-LR作用下，PCNA表達(dá)量及LIDG表達(dá)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義。當(dāng)MC-IR濃度在0.01～1.0μg/ml范圍內(nèi)，PCNA表達(dá)量隨MC-LR濃度的增加而增加，在MC-LR濃度達(dá)到1.25μg/ml時，PCN

4、A表達(dá)量開始下降；UDG表達(dá)的變化趨勢與PCNA一致。 4、正交分析結(jié)果顯示：與沒有維生素保護(hù)的染毒細(xì)胞相比，VitB6、VitB12、VC作用后，細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-PX含量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，并且VitB12與VC存在協(xié)同效應(yīng)。 5、在高濃度MC-LR干預(yù)下，與沒有維生素保護(hù)的染毒細(xì)胞相比，維生素B6、B12+VC作用后，PCNA表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。B6、B12、B12+VC作用后，UDG表達(dá)量增加，

5、差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 在低濃度MC-LR干預(yù)下，與沒有維生素保護(hù)的染毒細(xì)胞相比，維生素B6、B12作用后，PCNA表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；B6、VC、B12、B12+VC作用后，UDG表達(dá)量減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1、MC-LR在不同濃度時對肝細(xì)胞增殖和凋亡的作用是不同的，在低濃度時有促進(jìn)細(xì)胞增生的作用，凋亡率逐漸增加；在高濃度時卻表現(xiàn)為抑制細(xì)胞生長或細(xì)胞毒作用的表現(xiàn)，凋亡率逐漸降低。 2、