維生素C在Cr（Ⅵ）誘導(dǎo)肝細(xì)胞線粒體損傷中的時(shí)序效應(yīng).pdf

1、目的： 在體外實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，探討不同濃度維生素C(VitC)處理濃度在六價(jià)鉻(Cr(Ⅵ))引起L-02肝細(xì)胞線粒體損傷中的時(shí)序效應(yīng)。 方法： Cr(VI)用重鉻酸鉀(K<,2>Cr<,2>O<,7>)配制。將6.25、25、100、400、1600μmol／L VitC和2.5、10、40、160、6401μmol／L Cr(VI)分別加入L-02肝細(xì)胞的培養(yǎng)基中，處理24小時(shí)，用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率，通過(guò)回歸方

2、程求出VitC和Cr(Ⅵ)的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)，以此確定后續(xù)試驗(yàn)毒作用濃度。 分別將不同毒性比的VitC和Cr(VI)按照不同先后次序作用于L-02肝細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)，用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率；化學(xué)比色法測(cè)定線粒體內(nèi)谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和線粒體膜通透性；偏振分光光度法測(cè)定細(xì)胞膜流動(dòng)性；熒光分光光度法測(cè)定線粒體膜電位等。 結(jié)果： 1．

3、VitC和Cr(VI)的回歸方程分別為：Y=-36.001+33.638X，Y=5.007+28.576X。VitC與Cr(VI)對(duì)肝細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)分別為354.21μmol／L和35.65μmol／L。VitC與Cr(VI)的細(xì)胞增殖抑制毒性比約為1：10。 2．VitC對(duì)Cr(VI)所致肝細(xì)胞線粒體抗氧化系統(tǒng)損傷的影響：當(dāng)Cr(VI)與VitC毒性比為4：1時(shí)，先Cr(VI)后VitC處理組的MDA

4、含量顯著高于其他兩個(gè)不同處理時(shí)序組(P<0.05)；當(dāng)二者毒性比為1：1時(shí)，先Cr(VI)后VitC處理組GSH顯著低于其他兩個(gè)不同處理時(shí)序組，MDA含量顯著高于其他兩個(gè)不同處理時(shí)序組(P<0.05)；Cr(Ⅵ)和VitC同時(shí)試驗(yàn)組的SOD活性顯著高于其他兩個(gè)不同處理時(shí)序組(P<0.05)；當(dāng)毒性比為1：4時(shí)，3個(gè)不同處理時(shí)序組的GSH、MDA結(jié)果兩兩之間均有顯著性差異(P<0.05)；Cr(VI)和VitCN時(shí)試驗(yàn)組的SOD活性顯著高

5、于先Cr(VI)后VitC處理組(P<0.05)。 3．VitC對(duì)Cr(VI)所致細(xì)胞線粒體膜通透性改變的影響：三個(gè)不同Cr(VI)與VitC毒性比處理組中，先Cr(VI)后VitC處理組線粒體膜通透性最大。 4.VitC對(duì)Cr(Ⅵ)所致細(xì)胞線粒體膜電位改變的影響：三個(gè)不同Cr(Ⅵ)與VitC毒性比處理組，當(dāng)Cr(Ⅵ)與VitC毒性比為4:1和1:1時(shí)，3個(gè)不同處理時(shí)序組的線粒體膜電位結(jié)果兩兩之間均有顯著性差異(P<0.

6、05)；當(dāng)毒性比為1:4時(shí)，先Cr(Ⅵ)后VitC處理組線粒體膜電位顯著低于其他兩個(gè)不同處理時(shí)序組相比(P<0.05)。 5.VitC對(duì)Cr(Ⅵ)所致細(xì)胞線粒體膜流動(dòng)性改變的影響：膜流動(dòng)性未觀察到明顯變化。 結(jié)論： 1.VitC對(duì)Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞線粒體損傷的拮抗作用依次為：Cr(Ⅵ)與VitC同時(shí)試驗(yàn)組>先VitC處理后Cr(Ⅵ)染毒組>先Cr(Ⅵ)染毒后VitC處理組。 2.當(dāng)Cr(Ⅵ)為3