林生地霉與白念珠菌對(duì)小鼠大腦組織的致病性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:林生地霉(Geotrichumsivicola)是地霉屬新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)種，是一種行無(wú)性繁殖產(chǎn)關(guān)節(jié)孢子的酵母。首次是從巴西果蠅和印度柞蠶幼蟲身上分離出來(lái)[1]。2002年，我科從一位膿癬病人的皮損中首次分離出此菌[2]，并由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物研究所鑒定為Geotrichumsivicola。2005年，我科又從一例中毒性表皮壞死松解癥患者的血液中分離出此菌[3]。說(shuō)明林生地霉不僅可以感染人類，還可以導(dǎo)致系統(tǒng)感染。這兩株林生地霉在菌落

2、形態(tài)及基因序列上略有差異，在同一免疫狀態(tài)下致病力方面無(wú)差別[4]。李秀麗等[2]對(duì)林生地霉的形態(tài)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)生理學(xué)、分子生物學(xué)等進(jìn)行了初步研究，并通過(guò)皮膚感染的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及毛發(fā)受侵實(shí)驗(yàn)對(duì)其致病性進(jìn)行了初步探討。
　　 本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法，通過(guò)不同給藥途徑，給不同免疫狀態(tài)下的昆明小鼠分別注射林生地霉及白念珠菌，通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)小鼠的死亡率、2周內(nèi)平均存活天數(shù)、腦組織的真菌逆培養(yǎng)陽(yáng)性率及真菌負(fù)荷量的檢測(cè)，一方面來(lái)探討機(jī)體免疫狀態(tài)及感染途

3、徑對(duì)林生地霉及白念珠菌系統(tǒng)感染的影響，另一方面來(lái)研究林生地霉與白念珠菌對(duì)腦組織致病力方面有無(wú)差別。
　　 方法:
　　 1.系統(tǒng)性真菌感染動(dòng)物模型的制作將我科冰箱保存的菌株常溫復(fù)蘇后，接種于昆明小鼠體內(nèi)使其感染，解剖小鼠分離出恢復(fù)毒力的菌株。將分離出的菌株用無(wú)菌生理鹽水制成菌懸液，分別通過(guò)皮下、腹腔及靜脈接種于不同免疫狀態(tài)的昆明小鼠體內(nèi)。
　　 2.小鼠生存狀況及死亡情況的觀察連續(xù)觀察接種林生地霉及白念珠菌實(shí)驗(yàn)小

4、鼠2周內(nèi)的生存狀況及死亡情況，并計(jì)算各組小鼠的死亡率及平均存活天數(shù)。
　　 3.觀察腦組織大體改變將分期處死的小鼠解剖，并在無(wú)菌條件下取其腦組織，觀察是否腫大或萎縮、有無(wú)顏色改變及其表面有無(wú)膿性感染灶。
　　 4.組織真菌逆培養(yǎng)無(wú)菌條件下將腦組織研碎后分別接種于試管培養(yǎng)基中，置于37℃溫箱中培養(yǎng)，計(jì)數(shù)各組小鼠腦組織逆培養(yǎng)陽(yáng)性數(shù)，觀察其菌落形態(tài)以及菌絲和孢子的形態(tài)。
　　 5.組織真菌負(fù)荷量測(cè)定無(wú)菌條件下取不同免疫

5、狀態(tài)不同接種途徑下的小鼠腦組織，勻漿后分別進(jìn)行平皿培養(yǎng)，計(jì)算腦組織的真菌負(fù)荷量。
　　 6.組織病理學(xué)檢查分別取接種林生地霉與白念珠菌菌株小鼠的腦組織，用10％福爾馬林溶液固定，常規(guī)脫水、透明、包埋、切片，進(jìn)行HE和PAS染色，光鏡下觀察其組織病理學(xué)改變。
　　 結(jié)果:
　　 1.昆明小鼠感染后的生存狀況不論是接種林生地霉還是白念珠菌的昆明小鼠，免疫正常小鼠其生活習(xí)性無(wú)明顯改變。而皮下接種組小鼠背部接種部位均出現(xiàn)

6、一結(jié)節(jié)。免疫抑制腹腔組及免疫抑制靜脈組小鼠的進(jìn)食量及飲水量明顯減少，并逐漸消瘦。
　　 2.昆明小鼠感染后的死亡情況免疫抑制腹腔組及免疫抑制靜脈組在接種林生地霉或白念珠菌后均有小鼠死亡，其他組未出現(xiàn)小鼠死亡情況。接種不同菌種的免疫抑制腹腔組及免疫抑制靜脈組小鼠的死亡率及平均存活天數(shù)與其它組比較，均有顯著性差異(P＜0.05);而其它各組間比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。在同一免疫狀態(tài)和接種途經(jīng)下，白念珠菌與林生地霉比較，其小

7、鼠死亡率及平均存活天數(shù)均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　 3.各臟器大體改變將感染后小鼠解剖后，可見(jiàn)到不同程度的紫紅色的肝脾腫大及呈白色、粉色的肺臟萎縮，腹腔接種組個(gè)別小鼠臟器還可見(jiàn)到粟粒大小膿腫。部分白念珠菌接種小鼠腦組織可見(jiàn)出血點(diǎn)及液化現(xiàn)象，其余各組小鼠腦組織未見(jiàn)明顯變化。
　　 4.真菌逆培養(yǎng)接種白念珠菌小鼠腦組織培養(yǎng)3天后可見(jiàn)真菌生長(zhǎng)，其菌落形態(tài)及鏡下形態(tài)與接種的菌株相同。免疫抑制皮下組小鼠逆培養(yǎng)陽(yáng)性率明顯低

8、于免疫抑制腹腔組及免疫抑制靜脈組(P＜0.05)，后兩組比較其小鼠腦組織逆培養(yǎng)陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。接種林生地霉小鼠腦組織逆培養(yǎng)均為陰性。
　　 5.腦組織真菌負(fù)荷量接種白念珠菌的各組小鼠腦組織真菌負(fù)荷量比較，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　 6.組織病理學(xué)檢查接種林生地霉小鼠腦組織HE染色中腦組織未見(jiàn)明顯改變，PAS染色未找到真菌。接種白念珠菌小鼠腦組織HE染色中可見(jiàn)到變性壞死的神經(jīng)元細(xì)胞及少量炎細(xì)胞