肺癌趨化因子放射受體顯像的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1、研究四株肺癌細(xì)胞CXCR4表達(dá)以及99mTc-AMD3100體外攝取情況；2、研究99mTc-AMD3100荷瘤小鼠體內(nèi)分布和SPECT顯像；3、研究99mTc-AMD3100與不同示蹤劑在荷瘤及炎癥小鼠體內(nèi)分布和顯像的比較。
　　 方法：1、用細(xì)胞免疫熒光法和RT-PCR方法檢測(cè)A549、H460、95D和GLC80四株肺癌細(xì)胞CXCR4的表達(dá)情況；然后進(jìn)行肺癌細(xì)胞體外攝取99mTc-AMD3100實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞中加入9

2、9mTc-AMD3100，于不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞并檢測(cè)放射性攝取活度；最后分析肺癌細(xì)胞CXCR4表達(dá)與99mTc-AMD3100攝取的相關(guān)性；2、研究99mTc-AMD3100在正常NH小鼠體內(nèi)的生物分布；建立不同肺癌細(xì)胞株荷瘤小鼠模型，注射99mTc-AMD3100后于不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行SPECT顯像后，取血、心、肝、脾、肺、腎、肌肉和腫瘤組織，測(cè)量99mTc-AMD3100在各臟器的生物分布；對(duì)顯像最佳時(shí)間點(diǎn)荷瘤小鼠藥物分布情況進(jìn)行比較，

3、然后行Western-Blot檢測(cè)四種肺癌的CXCR4蛋白表達(dá)，并分析與腫瘤放射性攝取的相關(guān)性；3、將15只A549荷瘤小鼠分為AMD3100組、FDG組和FLT組，對(duì)三種示蹤劑在荷瘤小鼠體內(nèi)的生物分布進(jìn)行比較；將15只炎癥小鼠分為AMD3100組、FDG組和FLT組，對(duì)三種示蹤劑在炎癥小鼠體內(nèi)的生物分布進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：1、免疫熒光和RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)四株肺癌細(xì)胞CXCR4表達(dá)強(qiáng)度不同，依次為：A549、H460、95

4、D、GLC80，各細(xì)胞CXCR4表達(dá)水平有顯著差異；四株細(xì)胞對(duì)99mTc-AMD3100于30min、1h、2h、4h和6h均有攝取，于2h時(shí)間點(diǎn)攝取達(dá)到最高，放射活度依次為：A549、H460、95D、GLC80，不同細(xì)胞99mTc-AMD3100攝取的放射活度有顯著差異；不同肺癌細(xì)胞99mTc-AMD3100攝取與CXCR4表達(dá)水平呈線性正相關(guān)性。2、99mTc-AMD3100在NH小鼠體內(nèi)血液的清除速率較快，放射性攝取主要集中于肝

5、、脾、腎，而心、肺、肌肉臟器的放射性活度相對(duì)較低；A549組荷瘤小鼠在注藥后4h腫瘤部位出現(xiàn)較清晰顯影，H460組有較弱的顯影，95D組和GLC80組在各時(shí)間點(diǎn)均未見顯影；4h時(shí)間點(diǎn)不同肺癌組織放射性攝取濃度依次為：A549、H460、95D、GLC80，除95D組和GLC80組腫瘤放射性攝取無顯著差異外，其余各組間腫瘤放射性攝取差異顯著；Western-Blot檢測(cè)四種肺癌的CXCR4蛋白表達(dá)，依次為：A549、H460、95D、GL

6、C80，腫瘤放射性攝取與腫瘤CXCR4表達(dá)水平趨勢(shì)一致，但無顯著相關(guān)性。3、FDG組和FLT組小鼠注藥60min腫瘤部位顯像較清晰；FDG組，除心、腎外，腫瘤對(duì)其它組織的T/NT值大于2；FLT組，除腎、脾、肝外，腫瘤對(duì)其它組織的T/NT值大于2：FDG組與AMD3100組的腫瘤對(duì)心、肝、脾、腎的T/NT值存在顯著性差異；FLT組與AMD3100組的腫瘤對(duì)血、肝、腎的T/NT值存在顯著性差異。AMD3100組炎癥小鼠各時(shí)間點(diǎn)炎癥部位未顯

7、像；而FDG組小鼠60min右下肢有放射性熱區(qū)；FLT組小鼠右下肢未見顯像；AMD3100組炎癥與血、肌肉的T/NT值大于2；FDG組炎癥與血、肌肉的T/NT值小于2；FLT組炎癥與血，肌肉的T/NT值大于2.FDG組與AMD3100組的炎癥/血、炎癥/肌肉比值存在顯著性差異；FLT組與AMD3100組的炎癥/血、炎癥/肌肉比值無顯著性差異。
　　 結(jié)論：體外條件下不同肺癌細(xì)胞對(duì)99mTc-AMD3100攝取與肺癌細(xì)胞CXCR4

8、表達(dá)呈線性正相關(guān)；99mTc-AMD3100在A549和H460荷瘤小鼠的腫瘤部位顯像，同時(shí)99mTc-AMD3100在荷瘤小鼠體內(nèi)生物分布的特點(diǎn)，說明99mTc-AMD3100作為腫瘤顯像劑對(duì)肺部腫瘤的顯像進(jìn)行研究很有意義；99mTc-AMD3100在炎癥組織中無明顯濃聚，和18F-FDG相比能更好的鑒別良惡性病變；18F-FDG（反映腫瘤細(xì)胞葡萄糖代謝）和18F-FLT（反映腫瘤細(xì)胞增殖狀態(tài)）都是非腫瘤特異性示蹤劑，99mTc-AM