先天性小瞼裂綜合征FOXL2基因突變研究.pdf

1、本研究主要是通過收集BPES家系外周靜脈血并提取DNA，利用聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction，PCR)進(jìn)行FOXL2基因片段的擴(kuò)增，將其產(chǎn)物經(jīng)過純化后根據(jù)Sanger雙脫氧鏈末端終止法進(jìn)行基因測序及序列分析，利用NCBI網(wǎng)站上BLAST功能將所測的FOXL2序列與其原始序列的堿基進(jìn)行比對，從而可知所測BPES患者的FOXL2基因序列改變情況。通過對FOXL2基因的測序研究，明確FOXL2基因突變在BPES發(fā)病

2、中的作用，從而在基因及分子水平闡明BPES的發(fā)病機(jī)制，為今后在基因水平上阻止BPES的發(fā)生提供新的理論依據(jù)。 目的：對中國人小瞼裂綜合征家系患者致病候選基因——FOXL2基因的突變進(jìn)行研究，尋找新的突變位點(diǎn)；推測FOXL2基因突變后引起的蛋白改變，闡明BPES的可能發(fā)病機(jī)制。 方法：1.對所收集的4個(gè)BPES家系和部分散發(fā)病例共25名患者進(jìn)行臨床檢查與診斷，確定其疾病的類型，排除其他的局部或全身的遺傳性疾?。?2

3、.對BPES的患者25人和家系非患者50人及正常人50人抽取外周血，每人約3-5ml并予EDTA抗凝后進(jìn)行基因組DNA的提取； 3.根據(jù)GenBank獲得FOXL2原始序列，應(yīng)用軟件PRIMEREXPRESS2.0設(shè)計(jì)擴(kuò)增片段的引物，然后合成相應(yīng)的引物； 4.應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReaction，PCR)進(jìn)行產(chǎn)物的擴(kuò)增與純化； 5.根據(jù)Sanger法進(jìn)行FOXL2基因的測序及分析，利用

4、相關(guān)軟件確定所測FOXL2基因序列的突變情況及其相應(yīng)的氨基酸改變，從而推測蛋白的改變； 結(jié)果：1.在一個(gè)五代Ⅱ型BPES家系中，其患者的FOXL2基因測序圖顯示：堿基g.983的胞嘧啶C和g.984的鳥嘌呤G之間有一個(gè)胸腺嘧啶T的插入，即g.983-984insT；此外，移碼突變點(diǎn)后有多個(gè)點(diǎn)突變，即g.1082A＞C、g.1084T＞G、g.1092T＞G、g.1042A＞G、g.1044A＞C、g.1057A＞T、g.1077

5、A＞G、g.1088A＞C、g.1100G＞C、g.1101A＞G和g.1102G＞C；該家系中正常人、其他BPES家系和對照組均未發(fā)現(xiàn)與該家系相同的基因改變； 2.利用BCMSearchLaunch程序軟件進(jìn)行突變FOXL2基因的氨基酸序列的確定，結(jié)果顯示由于第983堿基以后的發(fā)生T堿基的插入導(dǎo)致遺傳密碼子的移碼，使插入點(diǎn)后所翻譯的氨基酸序列全部發(fā)生改變，在原始序列終止密碼子的地方，翻譯過程仍繼續(xù)進(jìn)行，最后導(dǎo)致了FOXL2核蛋