HMGB1對RA患者成纖維樣滑膜細胞增殖及IL-6、IL-8、MMP-3表達的影響.pdf

1、目的：探討高遷移率族蛋白1(High mobility group box1 protein,HMGB1)對類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)體外增殖情況及其對IL-6、IL-8、MMP-3表達的影響。
　　 方法：收集在我院行關節(jié)置換或關節(jié)鏡手術的RA患者的滑膜,采用消化酶培養(yǎng)法和組織塊培養(yǎng)法進行成FLS的原代培

2、養(yǎng),并傳代至3-6代用于實驗,免疫細胞化學檢測Vimentin鑒定FLS。分別使用不同濃度HMGB1(100、500、2000ng/ml)、LPS(100 ng/ml)、IL-1β(0.5 ng/ml)、HMGB1/IL-1β復合物(100/0.5、500/0.5、2000/0.5 ng/ml)及HMGB1/LPS復合物(100/100、500/100、2000/100 ng/ml)刺激FLS。用CCK-8法檢測FLS的增殖情況,ELI

3、SA法檢測細胞上清中IL-6、IL-8、MMP-3的濃度。
　　 結果：本實驗共取RA膝關節(jié)滑膜標本12例,原代培養(yǎng)15次,成功8次,其中用消化酶培養(yǎng)法10次,成功4次;組織塊培養(yǎng)法5次,成功4次。細胞傳至第三代時,Vimentin染色及光鏡證實為FLS。TNF-α激12h、24h、48h后FLS增殖較對照組明顯增高;不同濃度HMGB1(100、500、2000ng/ml)單獨刺激0、3、6、12、24、48h,FLS體外增殖差

4、異無統(tǒng)計學意義,IL-1β、HMGB1/IL-1β復合物、LPS、HMGB1/LPS復合物組在不同時間點所測FLS增殖程度差異無統(tǒng)計學意義。各組在刺激6h、24h、48h后FLS增殖情況與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義。小劑量HMGB1不能刺激FLS分泌IL-6,大劑量(2000ng/ml)可顯著刺激FLS分泌IL-6;IL-1β和LPS不能促進FLS分泌IL-6,但HMGB1與0.5ng/ml的IL-1β或100ng/ml的LPS共刺激

5、FLS可促進IL-6的分泌,且呈劑量依賴性。不同濃度的HMGB1、IL-1β和LPS不能刺激FLS分泌IL-8;但HMGB1與IL-1β或LPS共刺激FLS可促進IL-8的分泌,且呈劑量依賴性。不同濃度的HMGB1、IL-1β和LPS不能刺激FLS分泌MMP-3;但HMGB1與IL-1β或LPS協(xié)同刺激FLS可促進MMP-3的分泌,且呈劑量依賴性。
　　 結論：本研究顯示,HMGB1在體外單獨作用于FLS時,無或僅有少量促炎因子