2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:雷公藤甲素也稱雷公藤內(nèi)酯醇(Triptolide,TP)是雷公藤的主要活性成分之一。實(shí)驗(yàn)證明,雷公藤甲素具有抗炎、免疫抑制和抗增殖作用。臨床上常用雷公藤甲素治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,腎病綜合癥和支氣管哮喘等,取得了顯著的療效。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis,RA)是一種病因未明的自身免疫性疾病,其病理學(xué)以炎癥性改變?yōu)橹饕卣?。在炎癥反應(yīng)中,特別是急性炎癥反應(yīng)中,中性粒細(xì)胞(polymorphonuclearneu

2、trophil,PMN)無論從細(xì)胞數(shù)量和胞漿內(nèi)細(xì)胞毒性顆粒的含量來講都是處于炎癥反應(yīng)的核心位置。因此,炎癥局部中性粒細(xì)胞的數(shù)量和功能關(guān)系到諸如RA等炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。白細(xì)胞介素8(Interleukin-8,IL-8)可以選擇性誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞趨化,是關(guān)節(jié)炎癥中趨化中性粒細(xì)胞的最強(qiáng)大的細(xì)胞趨化因子和活化因子,它在RA急性期促使大量的中性粒細(xì)胞聚集于炎癥局部,是導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥的重要因素之一。聚集在炎癥局部

3、的中性粒細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)、毒性氧基團(tuán)、溶酶體酶等蛋白水解酶類,從而造成了自身組織細(xì)胞的損傷。在RA發(fā)生、發(fā)展的過程中,患者關(guān)節(jié)常常伴有滑膜成纖維細(xì)胞(synovialfibroblast,SF)的增生,過度增生的滑膜細(xì)胞可以侵入關(guān)節(jié)軟骨和周圍的組織,從而導(dǎo)致滑膜增厚甚至關(guān)節(jié)畸形等。這些增生的侵入性的SF在局部分泌大量的IL-8等炎癥因子,趨化大量中性粒細(xì)胞進(jìn)入局部關(guān)節(jié),導(dǎo)致炎癥進(jìn)一步發(fā)展。因此,減少SF分泌IL-8等炎癥因子可能是治療R

4、A等關(guān)節(jié)炎癥的關(guān)鍵一步。雷公藤甲素具有抗炎、抑制免疫的作用,可以消除RA等病人的關(guān)節(jié)腫脹、疼痛,減輕局部的炎癥反應(yīng),療效顯著。因此,有理由懷疑雷公藤甲素可能是通過抑制關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞產(chǎn)生IL-8等CXC趨化因子,降低了中性粒細(xì)胞進(jìn)入關(guān)節(jié)的數(shù)量,減低了中性粒細(xì)胞的反應(yīng)性,從而抑制了骨關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)生和發(fā)展。本研究從細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的蛋白水平,探討雷公藤甲素對體外培養(yǎng)的滑膜細(xì)胞在IL-18的刺激下產(chǎn)生IL-8的影響,從調(diào)節(jié)趨化因子角度去認(rèn)識(shí)雷公藤甲

5、素的抗炎機(jī)制。 方法:本研究運(yùn)用臨床截肢手術(shù)病人無炎癥的骨關(guān)節(jié)滑膜組織進(jìn)行培養(yǎng),應(yīng)用塊狀培養(yǎng)和酶消化培養(yǎng),進(jìn)而擴(kuò)增和純化細(xì)胞;運(yùn)用HE染色對培養(yǎng)的骨關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察;運(yùn)用CD68和Vimentin的免疫組化對細(xì)胞進(jìn)行鑒定;運(yùn)用ELISA分別檢測滑膜成纖維細(xì)胞對照組、IL-18處理組、雷公藤甲素預(yù)處理組和用雷公藤甲素預(yù)處理后IL-18處理組培養(yǎng)上清中IL-8濃度(2h,4h,6h,8h,16h,24h,6個(gè)不同時(shí)間

6、段),以及檢測24h內(nèi)不同濃度雷公藤甲素(0~100μg/L)影響IL-18刺激的滑膜成纖維細(xì)胞分泌上清中IL-8水平的變化;采用細(xì)胞免疫組化的方法分別檢測滑膜成纖維細(xì)胞對照組、IL-18處理組、雷公藤甲素預(yù)處理組和用雷公藤甲素預(yù)處理后IL-18處理組中骨關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞(24h)內(nèi)IL-8的表達(dá)水平。 結(jié)果:1.細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞鑒定:滑膜成纖維細(xì)胞經(jīng)過傳代3~5次后基本純化,利用免疫組化鑒定Vimentin陽性99%以上,CD

7、68陰性99%以上。2.IL-8表達(dá)水平的ELISA結(jié)果:(1)IL-18作用后,滑膜成纖維細(xì)胞分泌的IL-8的表達(dá)水平隨時(shí)間的增加而增加,在8h左右分泌最快。(2)正常細(xì)胞對照組、雷公藤甲素組與IL-18處理組相比較IL-8的表達(dá)明顯增加,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著;同時(shí),雷公藤甲素預(yù)處理后IL-18處理組中滑膜成纖維細(xì)胞分泌的IL-8的水平比IL-18組的IL-8分泌水平明顯降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著,并且可能在作用2h后雷公藤甲素就開始抑制IL-8

8、的分泌。(3)雷公藤甲素劑量依賴性地抑制IL-18誘導(dǎo)的滑膜成纖維細(xì)胞分泌IL-8的水平,60μg/L雷公藤甲素可以使抑制作用達(dá)到最適。3.應(yīng)用免疫組化方法檢測雷公藤甲素在60μg/L時(shí),不同處理組作用24h后細(xì)胞內(nèi)IL-8的表達(dá),實(shí)驗(yàn)結(jié)果利用IMAGE-PROPLUS軟件系統(tǒng)測定細(xì)胞圖片染色的免疫組化光密度值(immuno-histio-chemicalopticaldensity,IOD),結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常細(xì)胞對照組、雷公藤甲素組與IL

9、-18處理組相比較IL-8的表達(dá)明顯增加,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著;同時(shí),雷公藤甲素預(yù)處理+IL-18處理組中滑膜成纖維細(xì)胞分泌的IL-8的水平比IL-18組的IL-8分泌水平低很多,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證明了滑膜成纖維細(xì)胞表達(dá)Vimentin抗原,而不表達(dá)CD68抗原,這與以前的研究結(jié)果相一致。IL-18可以誘導(dǎo)骨關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞合成分泌IL-8。然而,雷公藤甲素則能夠抑制IL-18誘導(dǎo)的骨關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞合成、分泌IL-

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