配體交換和多糖類CSPs手性分離性能的研究.pdf

1、隨著生命科學(xué)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)一對光學(xué)對映體通常在藥理及生理活性方面有很大的差異，這種差異在手性藥物中表現(xiàn)較明顯，因此將外消旋體拆分為單一對映體的方法與技術(shù)一直受到廣泛關(guān)注。迄今，色譜法是拆分外消旋體最有效的方法之一，其中高效液相色譜法因其具有分離快速、準(zhǔn)確，不會破壞對映體的生理活性和結(jié)構(gòu)等優(yōu)勢而被廣泛用于農(nóng)業(yè)、生物和醫(yī)藥等領(lǐng)域，因此，對高效液相色譜手性固定相(HPLC-CSP)的開發(fā)與研究一直是色譜技術(shù)研究的關(guān)鍵。在眾多手性固定相中，配

2、體交換色譜手型固定相和多糖類手性固定相的研究和應(yīng)用比較廣泛。本文分別制備了涂敷型和鍵合型配體交換色譜手性固定相，并考察了色譜條件的變化對氨基酸對映體手性拆分的影響，此外還考察了氨基酸及其衍生物在ChiralPak IA柱上的拆分情況。主要研究內(nèi)容包括：
　　 ⑴將S-三苯甲基-L-半胱氨酸((R)-STC)作為手性選擇子，采用動態(tài)涂敷法涂敷到反相ZORBAX SB-C18色譜柱上，制備了涂敷型配體交換色譜手性固定相。利用紫外分光

3、光度法測定并計算出手性選擇子的涂敷量。
　　 ⑵以3-縮水甘油基丙基三甲氧基硅烷(KH-560)為改性劑對酸化后的硅膠進行改性，再以L-苯丙氨酸為手性選擇子與改性硅膠鍵合，制成鍵合型配體交換色譜手性固定相。利用紅外光譜和熱重分析對反應(yīng)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進行表征，利用所得的失重率得出手性固定相的鍵合量。采用篩分和溶劑沉降等方法對手性固定相材料進行預(yù)處理，使手性固定相粒徑均勻，從而保證了柱壓的穩(wěn)定以及色譜柱的手性分離能力。
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4、分別考察了甲硫氨酸和多巴等多種對映體在以S-三苯甲基-L-半胱氨酸和L-苯丙氨酸為手性選擇子的配體交換色譜手性固定相上的拆分情況，并研究了銅鹽的種類，Cu2+濃度、流動相pH值等色譜條件對分離效果的影響。實驗表明：色譜體系中任一組分(Cu2+、樣品和緩沖鹽)濃度的變化對對映體拆分的影響很大，由于受到配體交換過程中絡(luò)合平衡的制約，濃度變化要適中，過大或過小都會使分離效果變差。兩種手性固定相的對映體拆分過程都在25℃時取得了較高的分離度。S

5、-三苯甲基-L-半胱氨酸手性固定相在以CuSO4水溶液為流動相的體系中得到了較好的拆分效果，四種氨基酸對映體幾乎在所有色譜條件下都達到了基線分離。其中，外消旋藥物多巴在涂敷型手性固定相上實現(xiàn)了基線分離，為L-多巴的獲取提供了一個新的途徑。L-苯丙氨酸手性固定相則在Cu(OAc)2的KH2PO4緩沖溶液中取得了較好的分離效果。通過對兩種手性固定相手性分離能力的比較，發(fā)現(xiàn)以s-三苯甲基-L-半胱氨酸為手性選擇子的手性固定相對所研究的對映體的

6、拆分能力要優(yōu)于L-苯丙氨酸手性固定相。
　　 ⑷研究了正相條件下多巴、苯丙氨酸以及N-取代氨基酸對映體在Chiralpak IA柱上的拆分情況。實驗表明：三種N-取代氨基酸在該色譜柱上都得到了拆分，多數(shù)達到了基線分離，多巴和苯丙氨酸得到了部分分離。同常規(guī)流動相(正己烷/異丙醇)相比，選用乙醇作為極性組分能夠得到較好的分離效果。當(dāng)乙醇的濃度增加時，保留因子隨之減小，分離因子在乙醇體積分數(shù)為35％時達到最大值。提高流動相添加劑三氟乙