神經(jīng)生長(zhǎng)因子在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神經(jīng)節(jié)中的表達(dá).pdf

1、目的： 通過(guò)動(dòng)物模型研究糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglia，DRG)中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nervegrowth factor，NGF)的表達(dá)情況，分析糖尿病膀胱病變(diabetic cystopathy，DC)與膀胱及腰骶DRG中NGF表達(dá)的相關(guān)性，探討NGF在DC發(fā)生發(fā)展中的作用以及DC的發(fā)病機(jī)制，為應(yīng)用NGF治療DC奠定理論基礎(chǔ)。 方法： 成年雌性Sprague-Dawle

2、y(SD)大鼠35只，體重200-250g，隨機(jī)分成2組，正常對(duì)照組15只，糖尿病模型組20只。應(yīng)用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)形成I型糖尿病大鼠模型，劑量為60mg/kg。設(shè)立正常對(duì)照組。兩組均普通飼料飼喂，自由進(jìn)食進(jìn)水。注射STZ 72小時(shí)后測(cè)尾靜脈血葡萄糖濃度(blood glucose，BG)。糖尿病模型組大鼠BG>16.7mmol/L為模型成功。造模成功8周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，再次檢測(cè)兩組大鼠尾靜脈血葡萄糖濃

3、度，糖尿病模型組大鼠BG≤16.7mmol/L仍被排除。實(shí)驗(yàn)前1天測(cè)定代謝籠24小時(shí)尿量。實(shí)驗(yàn)切取完整膀胱和兩側(cè)腰6骶1DRG，稱量膀胱濕重。蘇木素-伊紅(Haematoxylin-Iraq red，HE)染色后，光鏡下觀察糖尿病大鼠膀胱逼尿肌和腰6骶1DRG的形態(tài)學(xué)變化。據(jù)此確認(rèn)糖尿病模型組DC的形成。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)膀胱逼尿肌細(xì)胞和腰6骶1DRG神經(jīng)元中NGF的表達(dá)情況。光鏡下觀察結(jié)果，膀胱逼尿肌細(xì)胞內(nèi)或腰6骶1DRG神經(jīng)元

4、內(nèi)含有棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片在高倍鏡(×400)下選擇8-10個(gè)視野并記數(shù)100個(gè)細(xì)胞，判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10％為陰性表達(dá)(一)，≥10％、<30％為弱陽(yáng)性表達(dá)(+)，≥30％、<60％為中度陽(yáng)性表達(dá)(++)，≥60％為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(+++)。采用SPSS13.0系統(tǒng)軟件對(duì)數(shù)據(jù)處理：結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±Std.)表示，進(jìn)行t和t'檢驗(yàn)及等級(jí)資料秩和檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：造模成功8周后，肉眼觀察：糖尿病模

5、型組大鼠具有典型的糖尿病狀態(tài)，皮毛失去光澤，飲水量、食量、尿量增加，排泄稀便等。糖尿病模型組大鼠血糖明顯高于正常對(duì)照組，為(30.9±3.3mmol/L)vs(4.8±0.3mmol/L)(t'=35.260，P<0.05)；糖尿病模型組大鼠體重較正常對(duì)照組增長(zhǎng)緩慢，為(248.05±15.52g)vs(322.80±15.92g)(t=13.949，P<0.0005)；代謝籠24小時(shí)尿量測(cè)定：糖尿病模型組大鼠明顯大于正常對(duì)照組，為(8

6、8.31±7.22ml)vs(20.93±2.90ml)(t'=37.853，P<0.05)；膀胱濕重測(cè)定：糖尿病模型組大鼠膀胱濕重明顯重于正常對(duì)照組，為(171.15±6.08mg)vs(135.53±5.33mg)(t=18.059，P<0.0005)。HE染色后光鏡下觀察兩組大鼠逼尿肌和腰6骶1DRG結(jié)構(gòu)表現(xiàn)。正常對(duì)照組：移形上皮細(xì)胞排列整齊，固有膜完整，逼尿肌細(xì)胞大小形態(tài)均一，肌纖維排列有序，肌束之間結(jié)構(gòu)緊密，間隙被結(jié)締組織所充

7、滿；神經(jīng)元細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)緊密。糖尿病模型組：移形上皮細(xì)胞排列紊亂，固有膜充血水腫，粘膜下層有明顯的嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)，逼尿肌肌細(xì)胞肥大，形態(tài)多樣，肌束排列紊亂松散，肌束橫斷面飽滿，體積增加，肌束之間間隙明顯增寬，膠原及纖維組織增生，肌束間小血管充血；神經(jīng)元細(xì)胞排列紊亂松散，細(xì)胞水腫，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)松散，間質(zhì)增生。根據(jù)以上結(jié)果可以認(rèn)為糖尿病模型組大鼠DC形成。 免疫組化結(jié)果顯示：正常對(duì)照組大鼠膀胱壁NGF主要分布在逼尿肌細(xì)胞漿內(nèi)

8、，在移行上皮和固有膜也有少量表達(dá)；而糖尿病模型組大鼠膀胱壁NGF也主要分布在逼尿肌細(xì)胞漿內(nèi)，表達(dá)卻明顯較少。正常對(duì)照組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率為86.67％，而糖尿病模型組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率僅為35％。 利用等級(jí)資料秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后得出：μ=3.1499，P<,單側(cè)><0.001，即正常對(duì)照組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞內(nèi)NGF表達(dá)水平與糖尿病模型組之間的差異有顯著性，也就是說(shuō)糖尿病模型組大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞中NGF的

9、表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照組。同樣，正常對(duì)照組大鼠腰6骶1DRG神經(jīng)元中NGF主要分布在細(xì)胞漿內(nèi)；而糖尿病模型組大鼠腰6骶1DRG神經(jīng)元中NGF也主要分布在細(xì)胞漿內(nèi)，表達(dá)卻明顯較少。正常對(duì)照組大鼠腰6骶1DRG神經(jīng)元細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率為93.33％，而糖尿病模型組大鼠腰6骶lDRG神經(jīng)元細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率僅為50％。利用等級(jí)資料秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后得出：μ=3.1039，P<,單側(cè)><0.001，即正常對(duì)照組大鼠腰6骶1DRG神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)NG