神經(jīng)干細(xì)胞移植對大鼠糖尿病性膀胱神經(jīng)生長因子表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模禾接懮窠?jīng)干細(xì)胞移植治療糖尿病大鼠膀胱功能障礙的療效及NGF的表達(dá)情況研究。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.采用懸浮法培養(yǎng)、收集NSCs，觀察NSCs原代及傳代細(xì)胞的形態(tài)、生長特點(diǎn)，并進(jìn)行Nestin等免疫化學(xué)染色，鑒定是否為神經(jīng)干細(xì)胞。
　　2.將SD大鼠（n=60）隨機(jī)選40只進(jìn)行單次腹腔注射鏈尿佐菌素（60mg/kg）建立糖尿病模型，剩余20只為陰性對照組。根據(jù)是否成模將其進(jìn)一步分為：陽性對照組、NSCs治療組

2、。
　　3.第8周時，NSCs治療組采取膀胱肌肉注射移植NSCs，陽性對照組注射等量的培養(yǎng)液，陰性對照組不做任何處理。4周后，通過尿流動力學(xué)檢測膀胱功能；取出膀胱，行 HE染色觀察膀胱逼尿肌形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組化、Western-blotting檢測膀胱組織中NGF的分布及表達(dá)情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.用懸浮培養(yǎng)法可得到大小不一、形態(tài)規(guī)則、呈懸浮狀的神經(jīng)球，經(jīng)檢測Nestin等抗原染色陽性，為神經(jīng)干細(xì)胞。

3、>　　2.注射STZ3天后大鼠糖尿病成模率達(dá)90％，12周血糖穩(wěn)定。尿流動力學(xué)發(fā)現(xiàn)，陽性對照組其膀胱容量增大、殘尿量增多、排尿時間間隔延長，經(jīng)NSCs治療后其殘尿量明顯減少、排尿時間間隔縮短。
　　3.陽性對照組膀胱組織HE染色可見逼尿肌肌束排列紊亂，結(jié)構(gòu)松散，肌束斷裂，肌束間間隙明顯增寬水腫，淋巴細(xì)胞浸潤，肌束間膠原纖維減少，小血管充血，肌細(xì)胞萎縮明顯病理改變。經(jīng)NSCs移植治療后，膀胱逼尿肌肌束排列較整齊，結(jié)構(gòu)較緊密，肌束間膠

4、原纖維增多等改變。
　　4.免疫組化檢測結(jié)果：陽性對照組NGF的表達(dá)區(qū)域較陰性對照組明顯減少，NSCs治療組較陽性對照組明顯增多，NGF的表達(dá)區(qū)域主要在膀胱逼尿肌細(xì)胞的胞核、胞漿，粘膜也有少量表達(dá)。
　　5. Western-blotting測定結(jié)果：陽性對照組中NGF表達(dá)水平較陰性對照組減少，NSCs治療組中NGF表達(dá)水平較陽性對照組明顯增高。
　　結(jié)論：
　　1.從胎齡15天的鼠胚胎體的海馬中可成功分離培養(yǎng)出