聚乳酸順鉑磁性微球靶向治療肺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：自行制備抗腫瘤藥物聚乳酸順鉑磁性微球(PLA-CDDP-MMS)，并對(duì)其特性進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)其體外藥物緩釋性與磁響應(yīng)性，為肺癌綜合靶向治療提供實(shí)驗(yàn)材料，為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 方法：采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備包裹順鉑和納米級(jí)Fe3O4磁粉的聚乳酸微球，將順鉑100mg、Fe3O4納米磁粉50mg、加至濃度2.5％的聚乳酸二氯甲烷溶液4ml中，經(jīng)超聲乳化分散，加入分散相中，攪拌速度1500r.min-1，成型溫度25℃。用光學(xué)顯微

2、鏡，電子顯微鏡觀察形態(tài)，測(cè)定粒徑。用紫外分光光度儀測(cè)定載藥量，原子吸收光譜儀測(cè)定釋放率，外加磁場(chǎng)下觀察磁響應(yīng)性。 結(jié)論：聚乳酸順鉑磁性微球在體外具有較好的磁響應(yīng)性和藥物緩釋性，可作為磁靶向抗腫瘤藥物載體。 目的：驗(yàn)證自行制備的聚乳酸順鉑磁性微球在體外對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的藥物活性，和對(duì)裸鼠移植肺腺癌的抑制作用。 方法：1.采用MTT法分析聚乳酸順鉑磁性微球?qū)θ朔蜗侔〢549細(xì)胞體外的殺傷作用。設(shè)立試驗(yàn)組及對(duì)照組

3、，試驗(yàn)組分別加入CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS懸液、PLA-MMS懸液。每種藥物7個(gè)濃度，每個(gè)濃度做4個(gè)平行孔，酶標(biāo)儀測(cè)光吸收度，根據(jù)每個(gè)濃度的吸光度值，算出相應(yīng)的細(xì)胞抑制率(IR)。 2.計(jì)數(shù)細(xì)胞密度觀察不同藥物對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響：設(shè)立CDDP組、PLA-CDDP-MMS組、PLA-MMS組、對(duì)照組。從接種時(shí)間算起，分別在12h、24h，、48h、72h于倒置顯微鏡下用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)臺(tái)采用盲法計(jì)數(shù)，至第3

4、天結(jié)束。以培養(yǎng)時(shí)間(h)為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度(×104個(gè)/ml)為縱坐標(biāo)，繪制培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。 3.觀察聚乳酸順鉑磁性微球?qū)β闶笠浦卜蜗侔┑闹委熜Ч郝闶笞笠钙は陆臃N人肺腺癌A549細(xì)胞，建立裸鼠移植肺腺癌模型，將荷瘤裸鼠分為3組(對(duì)照組、CDDP組、PLA-CDDP-MMS組)，觀察腫瘤體積變化和腫瘤生長(zhǎng)率、腫瘤抑制率(TIR)、腫瘤壞死程度、治療后荷瘤裸鼠自然存活時(shí)間及生命延長(zhǎng)率(ILS)。 結(jié)果1.MTT法結(jié)果顯

5、示在最底濃度0.04g/ml時(shí)，三組藥物對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的抑制率IR均較低，三組比較無明顯差異(P＞0.05)；在0.08～2.0μg/mlCDDP組IR明顯高于PLA-CDDP-MMS組，P＜0.05；在4.0～8.0μg/mlCDDP組與PLA-CDDP-MMS組IR無顯著差異(P＞0.05)；在0.04～4.0μg/mlCDDP組與PLA-CDDP-MMS組藥物對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的抑制率IR均隨濃度的增加而增加；但在4.

6、0～8.0μg/ml隨濃度的增加IR增加幅度不明顯。PLA-MMS在0.2～40.0μg/ml濃度增加200倍，但細(xì)胞抑制率無顯著增加。 2.細(xì)胞密度計(jì)數(shù)結(jié)果顯示隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)均有不同程度的增加，在72hCDDP組與對(duì)照組比，P＜0.001；PLA-CDDP-MMS組與對(duì)照組比，P＜0.01；CDDP組與PLA-CDDP-MMS組比，P＜0.05，說明含順鉑相同劑量時(shí)，前者對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響更加明顯；

7、PLA-MMS組與對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)計(jì)數(shù)接近，說明其對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)無明顯影響。 3.荷瘤裸鼠治療前各組腫瘤體積比較無明顯差異，治療后對(duì)照組腫瘤體積明顯增大，差異有顯著性(P＜0.001)；CDDP組治療后體積也有增大，和治療前比較差異有顯著性(P＜0.01)；PLA-CDDP-MMS組治療后體積稍有縮小，但和治療前比較差異無顯著性(P=0.061)；治療后治療組體積和對(duì)照組比較差異均有顯著性(P＜0.01)；和CDDP組比

8、較，PLA-CDDP-MMS組體積縮小明顯，差異有顯著性(P＜0.01)；CDDP組TIR為22.4％，PLA-CDDP-MMS組為64.6％，與CDDP組比P＜0.01。病理組織學(xué)觀察：對(duì)照組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活躍，CDDP組以中度壞死為主；PLA-CDDP-MMS組以重度壞死為主。PLA-CDDP-MMS組存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，平均(45.6±5.8)天；而CDDP組平均存活時(shí)間(26.7±2.3)天，和對(duì)照組(23.3±3.5)天比無顯著性

9、差異，P=0.36。 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)制備的聚乳酸順鉑磁性微球在體外對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞有抑制作用，并存在濃度依賴關(guān)系； 2.本實(shí)驗(yàn)制備的聚乳酸順鉑磁性微球?qū)β闶笠浦卜蜗侔┯酗@著抑制作用，能使荷瘤裸鼠平均生存時(shí)間明顯延長(zhǎng)。 目的：1.研究PLA-CDDP-MMS在大鼠體內(nèi)的藥物緩釋性和外加磁場(chǎng)作用下對(duì)大鼠肺組織的靶向性； 2.比較肺動(dòng)脈灌注PLA-CDDP-MMS與灌注CDDP游離藥物、灌注CDDP并結(jié)

10、扎肺動(dòng)脈時(shí)藥物動(dòng)力學(xué)變化。 方法：1.經(jīng)大鼠尾靜脈注入CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS懸液，測(cè)定在不同時(shí)間點(diǎn)CDDP組、靶向組和非靶向組大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)變化，及靶肺鐵原子含量。并比較CDDP組和微球組在用藥后168h血常規(guī)變化；并對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肺、腎、肝行組織學(xué)檢查，了解栓塞情況；2.經(jīng)選擇性肺動(dòng)脈灌注CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS懸液，測(cè)定CDDP灌注組、CDDP灌注+結(jié)扎組、及PLA-CDDP-MMS灌注+磁場(chǎng)