人皮膚細(xì)胞光損傷及相關(guān)中西藥光保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:觀察中波紫外線輻射(UVB)對(duì)體外培養(yǎng)的原代及永生化角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的損傷作用;觀察羥氯喹和中藥單體(川芎、黃芩及EGCG)所具有的光保護(hù)效應(yīng);探討其相關(guān)作用環(huán)節(jié)和機(jī)制.方法:1.細(xì)胞培養(yǎng):由健康人皮膚標(biāo)本中分離培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,并培養(yǎng)永生化角質(zhì)形成細(xì)胞,分別定量接種于培養(yǎng)皿或96孔板中.2.紫外線照射:以一定劑量UVB(30、60、90mJ/cm2)照射培養(yǎng)細(xì)胞并加入工具藥物進(jìn)行干預(yù)處理.3.細(xì)胞活性檢測(cè):觀

2、察細(xì)胞損傷的形態(tài)學(xué)變化;MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性;細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線.4.ELISA檢測(cè):ELISA檢測(cè)各組樣本上清液中IL-6和TNF-α含量.5.細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè):流式細(xì)胞儀檢測(cè)各受試組細(xì)胞周期及凋亡率.6.基因表達(dá)檢測(cè):RT-PCR法檢測(cè)各受試組p53,p21,c-fos基因表達(dá).結(jié)論:羥氯喹、川芎、黃芩及EGCG可在不同程度上抑制中波紫外線(UVB)輻射對(duì)人皮膚細(xì)胞(原代及永生化角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞)的損傷效應(yīng),這