人肝門部膽管癌裸鼠肝門移植模型的建立及CD、HSV-tk雙自殺基因治療實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文人肝門部膽管癌裸鼠肝門移植模型的建立及CD、HSV-tk雙自殺基因治療實(shí)驗(yàn)研究姓名：李志偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：普外科指導(dǎo)教師：王占民20040315山東大學(xué)博士學(xué)位論文第一部分人肝門部膽管癌裸鼠肝門移植模型的建立及其生物學(xué)特性研究博士研究生博士生導(dǎo)師李志偉王占民教授中文摘要目的 建立人肝門部膽管癌裸鼠肝門移植模型，對其生物學(xué)特性進(jìn)行初步探討。方法收集第9 0 代肝門部膽管癌細(xì)胞系F R H 細(xì)胞( 2 X 1 0

2、 6 ) 接種于6 只B a l b ／c 裸鼠后肢背側(cè)皮下，兩周左右，有5 只B a l b ／c 裸鼠后肢背側(cè)皮下移植瘤長至約8 m m×6 m m ．切取裸鼠皮下移植瘤邊緣直徑約l m m 組織塊植入B a l b ／c 裸鼠肝門部肝實(shí)質(zhì)內(nèi)，共3 2 只，觀察裸鼠生活情況。每周取兩只裸鼠在麻醉下剖腹探查，觀察肝門部腫瘤生長狀況，測量腫瘤直徑，計(jì)算腫瘤體積，繪制裸鼠腫瘤生長曲線。待裸鼠出現(xiàn)黃疸，全身衰竭時(shí)，予以處死，抽血檢

3、查肝功能；解剖肝門部腫瘤及觀察周圍浸潤情況，有、無遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移并行病理檢查。裸鼠肝門部移植瘤與人肝門部膽管癌標(biāo)本進(jìn)行比較，觀察腫瘤病理結(jié)構(gòu)；透射電鏡觀察腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；免疫組化檢測V E G F 、b F G F 、P C N A 、b c l - 2 、F a s 、P 5 3 、P 2 1 、M M P - 9 、T I M P —l 、T I M P 一2 、C D 3 4 表達(dá)情況，測定腫瘤微血管密度( M V D ) ，。結(jié)

4、果3 2 只裸鼠建成3 0 只肝門部腫瘤移植模型，成瘤率9 4 ％；建成的3 0 只模型中2 8 只出現(xiàn)黃疸，黃疸出現(xiàn)率為9 3 ％。接種后2 周左右可觸及肝門部有小結(jié)節(jié)，平均4 周左右出現(xiàn)黃疸，6 周左右裸鼠開始出現(xiàn)惡液質(zhì)。解剖發(fā)現(xiàn)肝門部有腫瘤生長，腫瘤生長較快，長徑1 ．8 ～2 ．8 c m ，包膜不完整，向周圍組織浸潤。主要向肝實(shí)質(zhì)內(nèi)生長，8 例侵及膽囊，6 例浸及肝門血管，3 例腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。腎臟、脾臟、胃腸、肺臟未見轉(zhuǎn)移灶

5、。肝功能檢查顯示：A L T 8 6 + 2 8 ．7 U ／L ，A S T 9 8 + - - - 3 1 ．3 U ／L ，G G T1 2 2±4 1 ．6 U ／L ，A L P1 6 8 ±6 5 ．8 U ／L ，T B I L 3 5 ±1 3 ．6 p m o l ／L ，D B I L 3 1 ±1 1 ．5 u m o l ／L ，均明顯高于正常對照組。肝門腫瘤H E 染色呈