nm23及E-cadherin與Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移及預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、肺癌已成為影響人民生命健康的重要疾病，但其目前的治療效果仍不盡如人意，即便是普遍認(rèn)為可手術(shù)根治的Ⅰ期患者，仍有25％在5年之內(nèi)死于復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。雖然基于常規(guī)病理檢驗(yàn)的肺癌分期系統(tǒng)可較好地提示患者的預(yù)后，但實(shí)際應(yīng)用中人們發(fā)現(xiàn)，同為pⅠ期患者預(yù)后往往并不一定完全相同。這提示即使臨床上認(rèn)為可通過(guò)手術(shù)完全切除的早期肺癌患者術(shù)前可能已經(jīng)發(fā)生了微小的、常規(guī)方法難以發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)移，即微轉(zhuǎn)移。而目前臨床上的常規(guī)檢查，包括影像學(xué)、組織病理學(xué)等，難以早期判斷轉(zhuǎn)移

2、的發(fā)生狀況。這啟示我們應(yīng)該從微轉(zhuǎn)移的角度繼續(xù)探討肺癌的準(zhǔn)確分期。
　　 微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)方法包括：連續(xù)組織切片法、免疫組化法、血清學(xué)檢查、流式細(xì)胞術(shù)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等。RT-PCR技術(shù)的敏感性高，正逐漸為人們所接受。
　　 常用的肺癌微轉(zhuǎn)移檢測(cè)常用分子標(biāo)記主要分為四大類(lèi)：組織特異性蛋白質(zhì)、腫瘤特異性抗原、癌基因和抑癌基因、組織特異性基因。組織特異性基因中的肺特異性X蛋白(LUNX)是人類(lèi)肺組織特異性基因，

3、有可能成為具有高敏感度和特異性的肺癌微轉(zhuǎn)移檢測(cè)指標(biāo)。
　　 某些與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因往往在發(fā)生轉(zhuǎn)移之前即已出現(xiàn)表達(dá)的異常，此時(shí)很可能是發(fā)生微轉(zhuǎn)移的早期階段。發(fā)現(xiàn)這些基因表達(dá)的改變與微轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系有利于對(duì)患者進(jìn)行更為準(zhǔn)確的分期。只有進(jìn)行準(zhǔn)確的術(shù)后分期，才能為肺癌患者多學(xué)科綜合治療措施的制定提供最重要的前提條件。
　　 第一部分、以L(fǎng)UNX mRNA為標(biāo)志物測(cè)定Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移及其對(duì)預(yù)后的影響
　　 研

4、究目的:
　　 基于RT-PCR法，以L(fǎng)UNX mRNA為標(biāo)志物，檢測(cè)p1期非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，并研究其與早期肺癌患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，探討以此方法檢測(cè)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的可行性。
　　 研究方法:
　　 收集根治性手術(shù)治療的Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌病例，并以免疫組化測(cè)定淋巴結(jié)細(xì)胞角蛋白(cytokeratins，CKs)表達(dá)的方法排除常規(guī)病理遺漏的轉(zhuǎn)移病例，最終收集40例pⅠ期病例。另選10例肺部良性病變手術(shù)病

5、例作為對(duì)照。
　　 所有肺癌患者都接受根治性肺葉切除，不包括全肺切除及各種姑息性切除的病例。根治性切除包括系統(tǒng)縱隔淋巴結(jié)清掃，即清掃至少包括3站縱隔淋巴結(jié)，總數(shù)不少于6枚。
　　 以RT-PCR方法測(cè)定各組淋巴結(jié)LUNX mRNA表達(dá)的情況，以此作為判定淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，分析淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與pⅠ期非小細(xì)胞肺癌各臨床病理特征、術(shù)后生存和無(wú)病生存的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 所有CKs表達(dá)陽(yáng)性的淋巴結(jié)于病理

6、復(fù)核時(shí)均發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)。剔除淋巴結(jié)CKs表達(dá)陽(yáng)性的病例，僅保留CKs表達(dá)陰性的病例。
　　 LUNX mRNA的表達(dá)：10例肺部良性病變的肺門(mén)淋巴結(jié)，均表達(dá)陰性。40例肺癌病例的原發(fā)灶均表達(dá)陽(yáng)性(100％)，14.6％的淋巴結(jié)和11.1％的縱隔淋巴結(jié)表達(dá)陽(yáng)性。16位(40％)患者的至少一站淋巴結(jié)LUNX mRNA表達(dá)陽(yáng)性，LUNX分期升級(jí)。重新分期后，LUNX-Ⅰa期13例，Ⅰb期11例，Ⅱa期3例，Ⅱb期6例，Ⅲa期7

7、例。淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與性別、年齡、病理分期、病理類(lèi)型、清掃淋巴結(jié)站數(shù)、清掃縱隔淋巴結(jié)站數(shù)等無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　 影響術(shù)后生存的因素包括：LUNX分期(P＜0.01)、縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移(P＜0.01)、清掃淋巴結(jié)總站數(shù)(P＜0.01)、清掃縱隔淋巴結(jié)站數(shù)(P＜0.05)、病理分級(jí)(P＜0.05)。有縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是無(wú)縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者的30.3倍(P＜0.01)，清掃縱隔淋巴結(jié)站數(shù)越多的患者死亡風(fēng)險(xiǎn)也隨之

8、提高，清掃6組縱隔淋巴結(jié)的患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是僅清掃3組縱隔淋巴結(jié)的患者的2.151倍(P＜0.05)。
　　 影響術(shù)后無(wú)病生存的因素包括：LUNX分期(P＜0.01)、淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移(P＜0.05)、縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移(P＜0.01)、清掃淋巴結(jié)總站數(shù)(P＜0.01)、清掃縱隔淋巴結(jié)站數(shù)(P＜0.01)、病理分級(jí)(P＜0.05)。有縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是無(wú)縱隔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者的19.6倍(P＜0.01)。
　　

9、結(jié)論:
　　 應(yīng)用免疫組化測(cè)定淋巴結(jié)CKs的表達(dá)只能發(fā)現(xiàn)常規(guī)病理漏檢的轉(zhuǎn)移，而非真正的“微轉(zhuǎn)移”。
　　 pⅠ期非小細(xì)胞肺癌區(qū)域淋巴結(jié)LUNX mRNA的異常表達(dá)與患者的術(shù)后總體生存和無(wú)病生存相關(guān)，能夠反映淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的情況。通過(guò)對(duì)pN0期非小細(xì)胞肺癌區(qū)域淋巴結(jié)LUNX mRNA異常表達(dá)的檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)其中的高?；颊邅喨?，有助于對(duì)肺癌患者進(jìn)行更精確的分期。如能早期加以干預(yù)，可以改善這部分患者的預(yù)后。
　　 第二部

10、分、nm23與E-cadherin蛋白表達(dá)與Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系
　　 研究目的:
　　 以免疫組化法檢測(cè)nm23和E-cadherin在pⅠ期肺癌原發(fā)灶的表達(dá)，并探討其與淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)性。
　　 研究方法:
　　 病例選擇、手術(shù)方式、標(biāo)本采集見(jiàn)第一部分。
　　 以免疫組化法檢測(cè)nm23和E-cadherin在肺癌原發(fā)灶的表達(dá)，并探討其與淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)性。<

11、br>　　 結(jié)果:
　　 nm23表達(dá)陽(yáng)性率在肺癌組織和正常肺組織間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，而E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率在肺癌組織顯著高于正常肺組織(P＜0.01)。
　　 nm23和E-cadherin在不同病理分期的肺癌組織中的表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但在以L(fǎng)UNX mRNA表達(dá)為標(biāo)志的不同分子分期間有顯著差異(P＜0.01)。
　　 nm23低表達(dá)組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移率61.90％(13/21

12、)顯著高于高表達(dá)組的15.79％(3/19)(P＜0.05)。E-cadherin低表達(dá)組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移率68.42％(13/19)顯著高于高表達(dá)組的14.29％(3/21)(P＜0.01)。
　　 nm23低表達(dá)組和高表達(dá)組的術(shù)后生存時(shí)間分別為20.90±1.81個(gè)月和26.12±0.60個(gè)月(P＜0.05)，術(shù)后無(wú)病生存時(shí)間分別為17.90±2.45個(gè)月和25.24±1.06個(gè)月(P＞0.05)。E-cadherin低表達(dá)組和

13、高表達(dá)組的術(shù)后生存時(shí)間分別為21.06±1.93個(gè)月和25.42±0.88個(gè)月(P＞0.05)，術(shù)后無(wú)病生存時(shí)間分別為18.44±2.46個(gè)月和23.95±1.65個(gè)月(P＜0.05)。
　　 Cox Regression風(fēng)險(xiǎn)比例模型分析結(jié)果提示肺癌原發(fā)灶nm23表達(dá)水平也是影響術(shù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，nm23低表達(dá)者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)者的13.31倍(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 nm23和E-cadh