柴胡疏肝散及拆方對(duì)抑郁模型大鼠行為學(xué)和腦組織p38MAPK、ERK5表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　觀察柴胡疏肝散及拆方對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)及額葉皮質(zhì)、海馬p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5(ERK5)表達(dá)的影響，探討柴胡疏肝散抗抑郁效果及其作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.將健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分六組:①正常組、②抑郁模型組、③柴胡疏肝散全方組（CHSGS組）、④柴胡疏肝散拆方Ⅰ組（拆方Ⅰ組）、⑤柴胡疏肝散拆方Ⅱ組（拆方Ⅱ組）、⑥氟西汀組。
　　2.采用慢性

2、輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(CUMS)建立抑郁大鼠模型。并給予相應(yīng)藥物灌胃。
　　3.分別于造模第1天（應(yīng)激前）、14天及28天測(cè)量各組大鼠體重、觀察敞箱試驗(yàn)和糖水消耗試驗(yàn)各項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)變化。
　　4.采用放射免疫方法測(cè)定各組大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)含量。
　　5.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法及蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Western-blotting)檢測(cè)各組大鼠額葉皮質(zhì)、海馬p38MAPK、ERK5的分布

3、、表達(dá)及磷酸化水平差異。
　　6.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量Real-Time PCR技術(shù)測(cè)定各組大鼠額葉、海馬p38 MAPK mRNA、ERK5 mRNA的表達(dá)差異。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)第1天各組大鼠體重及行為學(xué)指標(biāo)無明顯差別，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)過14-28天CUMS，模型組大鼠體重增加緩慢。敞箱試驗(yàn)中水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)得分減少;清潔動(dòng)作次數(shù)減少;中央格停留時(shí)間延長?？傄后w消耗、糖水消耗明顯減少，糖水

4、偏愛百分比明顯降低。與正常組比較，差異均具有顯著性(P＜0.01)。
　　2.經(jīng)14天灌胃，與模型組相比，CHSGS組大鼠體重增加;水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)得分及清潔動(dòng)作次數(shù)增加，中央格停留時(shí)間明顯減少;糖水消耗量及糖水偏愛百分比增加，差異均具有顯著性(P＜0.01或P＜0.05)。拆方Ⅰ組、拆方Ⅱ組、氟西汀組各項(xiàng)指標(biāo)與模型組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)28天灌胃，CHSGS組及氟西汀組與模型組比較，大鼠體重明顯增加，行

5、為學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善，差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05)。拆方Ⅰ及Ⅱ組同模型組相比，僅部分測(cè)量指標(biāo)改善(P＜0.05或P＜0.01)。CHSGS組與氟西汀組各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.模型組大鼠血清TNF-α、IL-6含量明顯升高。與正常組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.01)。CHSGS組、氟西汀組與模型組相比TNF-α、IL-6水平降低，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。拆方Ⅰ

6、、Ⅱ組與模型組相比，TNF-α水平無明顯改變，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。拆方Ⅰ組IL-6水平降低，同模型組相比，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示:p38MAPK及ERK5免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞在各組大鼠額葉、海馬均有表達(dá)。與正常組比較，模型組額葉及海馬p38 MAPK表達(dá)增加，灰度值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型組比較，CHSGS組和氟西汀組額葉、海馬p38MAPK表達(dá)減少，灰度值增加（

7、P＜0.05或P＜0.01）。拆方Ⅰ、Ⅱ組大鼠海馬p38MAPK表達(dá)與模型組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。各組大鼠額葉、海馬組織ERK5免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)改變不明顯，平均灰度值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Western-blotting定量分析顯示:與正常組比較，模型組額葉、海馬p38、p-p38MAPK，p-p38/p38MAPK均明顯增加，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。與模型組比較，CHSGS

8、組和氟西汀組額葉、海馬p38、p-p38及p-p38/p38MAPK均降低(P＜0.05)。拆方Ⅰ、Ⅱ組與模型組比較，額葉及海馬p38、p-p38及p-p38/p38MAPK均無明顯差別，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。各組大鼠額葉及海馬ERK5蛋白表達(dá)量均無明顯變化(P＞0.05)。模型組大鼠額葉及海馬p-ERK5、p-ERK5/ERK5水平明顯降低，與正常組比較，差異具有顯著性（P＜0.01或P＜0.05）。與模型組相比，CHSG

9、S組額葉及海馬p-ERK5、p-ERK5/ERK5明顯增加;氟西汀組海馬p-ERK5、額葉及海馬p-ERK5/ERK5增加，同模型組比較，差異均具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。拆方Ⅰ組及Ⅱ組p-ERK5、p-ERK5/ERK5水平降低，與模型組相比，差異均無顯著性(P＞0.05)。
　　5.RT-PCR結(jié)果示:各組大鼠額葉、海馬均可見p38 MAPK、ERK5的mRNA表達(dá)。模型組額葉、海馬p38MAPK mRNA表達(dá)量

10、較正常組上調(diào)，兩者差異具有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）。CHSGS組、拆方Ⅰ、Ⅱ組及氟西汀組額葉p38MAPK mRNA表達(dá)量與模型組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與模型組相比，CHSGS組及氟西汀組大鼠海馬p38MAPK mRNA表達(dá)量降低，差異具有顯著性(P＜0.05)。各組大鼠額葉皮質(zhì)及海馬ERK5 mRNA表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.抑郁模型組大鼠體重增加緩

11、慢、各項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)明顯異于正常組，說明抑郁模型大鼠食欲減退，體重減輕，興趣及快感喪失，活動(dòng)減退，與臨床抑郁癥狀相似。經(jīng)氟西汀抗抑郁治療后上述行為明顯改善，證明抑郁模型復(fù)制成功。
　　2.柴胡疏肝散可逆轉(zhuǎn)各項(xiàng)異常抑郁樣測(cè)量指標(biāo)，說明其具有抗抑郁作用。其抗抑郁效果與氟西汀相當(dāng)且起效快。柴胡疏肝散全方抗抑郁效果優(yōu)于其拆方Ⅰ、Ⅱ。提示疏肝解郁在抗抑郁治療中的重要作用;并認(rèn)為柔肝活血能加強(qiáng)疏肝解郁的功效。
　　3.抑郁大鼠血清炎性因子