參歸益智方對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠VEGF、P38MAPK表達(dá)的影響.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為記憶認(rèn)知障礙、情感性格及行為改變等。隨著社會(huì)的發(fā)展，人口老齡化日趨明顯，65歲以上，每增加5歲，AD發(fā)病率就會(huì)提高1倍，一半以上AD患者是85歲以上老年人，預(yù)計(jì)2050年后，AD患病率將是目前的4倍，甚至更高[1]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管生成

2、促進(jìn)因子，是一種高度特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，也是一種高效的血管形成和血管通透性誘導(dǎo)因子，在AD生理和病理過程中發(fā)揮重要作用[2]。P38MAPK是絲裂原活化蛋白激酶家族的成員之一，廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，可由缺血缺氧、炎癥因子、氧自由基、內(nèi)毒素等激活，激活后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，介導(dǎo)炎癥、凋亡等生物學(xué)效應(yīng)[3]，同時(shí)P38MAPK還能激活大量炎癥因子，而炎癥因子又可強(qiáng)烈激活P38MAPK通路，形成一個(gè)不斷增強(qiáng)的正反饋途徑，炎癥反應(yīng)逐漸

3、被放大，直接損傷神經(jīng)元，最終導(dǎo)致記憶力及認(rèn)知功能障礙[4]。近年來研究AD的許多學(xué)者認(rèn)為，AD患者存在血管功能障礙，腦缺血與AD間存在密切的聯(lián)系，腦缺血加速了AD患者的神經(jīng)變性進(jìn)程，對(duì)AD模型大鼠腦組織中直接注入VEGF后，可出現(xiàn)新血管生成，說明外源性VEGF可以有效的改善缺血組織的血液供應(yīng)，增加新生血管的數(shù)量，減輕海馬組織的損傷，從而改善AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[5]。本研究從血管內(nèi)皮功能在AD中的作用作為切入點(diǎn)，觀察參歸益智方對(duì)雙

4、側(cè)海馬區(qū)注射Aβ1-42所致的阿爾茨海默病大鼠海馬CA1區(qū)VEGF，P38MAPK及磷酸化P38MAPK蛋白的表達(dá)的影響，探討AD發(fā)病機(jī)理及參歸益智方對(duì)AD的治療作用機(jī)制。
　　 方法:健康清潔級(jí)SD雄性大鼠40只，按照隨機(jī)數(shù)字表法，隨機(jī)分為空白組，模型組，低劑量組和高劑量組，每組10只。采用立體定位儀向大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射凝聚態(tài)Aβ1-42各5μl建立AD動(dòng)物模型。造模1周后通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力;

5、2周后，低劑量按12.5g/kg，高劑量按25g/kg灌胃給藥，對(duì)照組僅給予相應(yīng)體積的生理鹽水，藥物干預(yù)共4周，每日2次。通過HE染色觀察大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)VEGF的表達(dá);提取大鼠海馬組織總蛋白，蛋白定量BCA法測(cè)蛋白濃度，采用WesternBlot法檢測(cè)P38MAPK及磷酸化P38MAPK蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:1、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):造模1周后，4組大鼠逃避

6、潛伏期不同(F=102.332，P＜0.05)，穿越平臺(tái)次數(shù)不同(F=8.487，P＜0.05)。模型組，低劑量組和高劑量組比空白組逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少(P＜0.05)。2、HE染色:空白組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊，形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)致密，分布均勻，數(shù)量多;模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列稀疏，明顯減少，結(jié)構(gòu)紊亂，數(shù)量減少;治療組與模型組大鼠相比，各治療組大鼠海馬形態(tài)均不同程度恢復(fù)，以高劑量組最為明顯

7、，神經(jīng)元數(shù)量增多，細(xì)胞排列較整齊，結(jié)構(gòu)較致密，形態(tài)較正常，分布較均勻。3、VEGF的表達(dá):4組大鼠海馬CA1區(qū)VEGF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)不同(F=105.859，P＜0.05)，模型組比空白組明顯減少(P＜0.05)，低劑量組比模型組明顯增多(P＜0.05)，高劑量組比模型組明顯增多(P＜0.05），高劑量組比低劑量組增多（P＜0.05）。4、P38MAPK在4組大鼠海馬組織表達(dá)水平無明顯變化(F=1.487，P＞0.05);磷酸化P38MAP

8、K在4組大鼠海馬組織表達(dá)不同(F=87.156，P＜0.05)，模型組比空白組表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，低劑量組比模型組表達(dá)降低（P＜0.05），高劑量組比低劑量組表達(dá)明顯降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1、采用凝聚態(tài)Aβ1-42注射雙側(cè)大鼠海馬區(qū)制作AD模型，大鼠出現(xiàn)了學(xué)習(xí)記憶能力減退，說明AD模型制作成功。2、參歸益智方能改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。3、AD模型大鼠海馬組織磷酸化P38MAPK表達(dá)增強(qiáng)，VEGF表達(dá)減