低濃度苯系物接觸人群遺傳損傷分子標(biāo)志物研究.pdf

1、目的：以低濃度苯系物職業(yè)接觸人群為研究對(duì)象，采用職業(yè)流行病學(xué)的方法和分子生物學(xué)技術(shù)，確定有效的敏感接觸標(biāo)志物和效應(yīng)標(biāo)志物，分析苯接觸劑量與遺傳損傷的劑量-反應(yīng)關(guān)系，驗(yàn)證現(xiàn)行苯職業(yè)接觸限值的安全性，在基因組水平篩選苯基因效應(yīng)標(biāo)志物，探討苯毒性作用的可能途徑,為進(jìn)一步研究苯毒性分子致癌機(jī)制提供線索。
　　方法：（1）應(yīng)用職業(yè)流行病學(xué)方法，對(duì)接觸低濃度苯系物職業(yè)人員進(jìn)行作業(yè)場(chǎng)所調(diào)查、健康危害調(diào)查和職業(yè)接觸評(píng)估；（2）建立了高效液相色譜三

2、重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜方法，同時(shí)測(cè)定尿中8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG、）、反-反式粘糠酸（ttMA）、苯巰基尿酸（S-PMA），作為接觸人群的接觸生物標(biāo)志物；（3）應(yīng)用染色體畸變率、尿8-OHdG、彗星試驗(yàn)（Olive尾距、尾長、尾DNA％含量）研究120名低濃度苯系物作業(yè)1年以上人員染色體、DNA損傷的效應(yīng)指標(biāo)；（4）應(yīng)用全基因表達(dá)譜芯片測(cè)定6名苯系物接觸人員和3名對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞基因表達(dá)水平，篩選異常表達(dá)基因，并用實(shí)時(shí)定量PCR（R

3、T-PCR）方法在小范圍人群中驗(yàn)證，初步確定苯接觸人員的基因生物標(biāo)志物，通過Gene Ontology、Pathway、GenMapp等數(shù)據(jù)庫分析相關(guān)信號(hào)通路。
　　結(jié)果：（1）在我國現(xiàn)行苯系物職業(yè)接觸限值水平以下，苯仍會(huì)對(duì)作業(yè)工人外周血白細(xì)胞造成影響，遺傳敏感性較高的作業(yè)工人在苯系物接觸早期（接觸苯1-2年內(nèi)）外周血白細(xì)胞已有改變。（2）在作業(yè)場(chǎng)所苯濃度（CTWA）0.25-5.98 mg/m3范圍內(nèi)，尿ttMA、S-PMA與空

4、氣中苯濃度均具有良好相關(guān)性（r2=0.8759、r2=0.7497），尿 ttMA略優(yōu)于尿 S-PMA。由于敏感性高和影響因素少，可作為低濃度職業(yè)性苯接觸的生物接觸標(biāo)記物。（3）職業(yè)接觸低濃度的苯（CTWA<6mg/m3）仍然可對(duì)接觸人員造成遺傳損傷，且損傷程度有隨苯濃度的增高而增強(qiáng)的趨勢(shì)；苯接觸濃度與尿8-OHdG含量呈一定的劑量-反應(yīng)關(guān)系（P<0.001、r2=0.425）；作為苯致遺傳損傷的效應(yīng)標(biāo)志物，尿8-OHdG的敏感性和特異

5、性略優(yōu)于彗星發(fā)生率；混雜接觸限值以內(nèi)（CTWA<50mg/m3）的甲苯、二甲苯不會(huì)對(duì)苯遺傳損傷產(chǎn)生協(xié)同或拮抗作用。（4）發(fā)現(xiàn)苯系物職業(yè)暴露人群外周血淋巴細(xì)胞出現(xiàn)差異表達(dá)的基因274個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的基因178個(gè)，表達(dá)下調(diào)的基因96個(gè)，差異表達(dá)最顯著的基因上調(diào)為12.89倍，下調(diào)為16.74倍。GO通路分析表明，差異表達(dá)的基因涉及核苷酸切除修復(fù)、氧化磷酸化、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白加工、細(xì)胞周期等21條通路。在15名低濃度苯系物暴露、且外周血白

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)相對(duì)偏低的作業(yè)工人中，TNFAIP3、CUL4A、LAIR2、PF4、GADD45A的有效差異性被RT-PCR所驗(yàn)證，可作為潛在的苯毒性基因效應(yīng)標(biāo)志物。
　　結(jié)論：
　　1、在我國現(xiàn)行苯系物職業(yè)接觸限值水平以下，苯仍會(huì)引起部分作業(yè)工人外周血白細(xì)胞的降低，同時(shí)具有一定的遺傳損傷效應(yīng)。
　　2、本研究建立的高效液相色譜三重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜法可同時(shí)測(cè)定尿中8-OHdG、ttMA和S-PMA，其中尿8-OHdG可作為苯致