苯并[a]芘對大鼠肝臟生物標志物的研究.pdf

1、目的:檢測苯并[a]芘(BaP)染毒大鼠肝組織中3-羥基苯并[a]芘(3-OHBaP)、(+)-anti-7，8-二氫二醇-9，10-環(huán)氧苯并[a]芘(BPDE)-DNA加合物、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽、丙二醛、8羥基脫氧鳥苷的含量，研究其變化規(guī)律以及苯并[a]芘對大鼠肝臟組織的暴露生物標志物和效應生物標志物的可行性。
　　 方法:準確稱取一定量的BaP標準品溶于玉米油中，配置成高劑量100mg/kg、中劑量50mg/kg

2、、低劑量5mg/kg的灌胃液待用。雄性SD大鼠224只，體重180-220g，隨機分為A、B、C、D四個組。A、B、C三個組為暴露組，分別為高、中、低劑量組，每組56只。D組為非暴露空白組。所有大鼠處理前12h禁食，自由飲水。A、B、C組分別灌胃2mL高劑量、中劑量、低劑量溶液，D組灌胃2mL空白玉米油。并于灌胃后0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h共7個時間點斷頭處死大鼠，迅速取出肝置于生理鹽水中，洗凈，濾紙吸干組織表面水

3、份，稱取臟器濕重，平均分成2份，一份裝袋密封，另一份加4倍生理鹽水勻漿，制成組織勻漿液，2份均-20℃保存。
　　 取大鼠肝組織勻漿液樣品100μL于離心管中，加入200μL乙腈，渦旋混合1min，離心10min(10000r/min)，取20μL上清液，利用高效液相色譜-熒光法在甲醇/水(97/3)，pH=4.5，流速:0.5mL/min，激發(fā)波長:365nm，檢測波長:450nm的色譜條件下外標法檢測3-OHBaP在大鼠肝組

4、織中的含量。
　　 將解凍的大鼠肝組織用解剖刀切成小碎塊，取50mg組織用組織基因組DNA提取試劑盒處理，提純的組織總DNA在0.1moL/LHCL、90℃恒溫水浴箱中水解4h，乙酸乙酯提取酸水解產(chǎn)物—苯并[a]芘-四醇，揮干乙酸乙酯，加入200μL二甲基亞砜復溶，取20μL，利用高效液相色譜-熒光法在甲醇/水(55/45)，pH=7.0，流速:1.0mL/min，激發(fā)波長:245nm，檢測波長:395nm的色譜條件下外標法檢測

5、苯并[a]芘-四醇在大鼠肝組織中的含量，以其來間接反應(+)-anti-BPDE-DNA加合物在大鼠肝組織中的含量。
　　 分別用超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒、微量還原型谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒、大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒測定大鼠肝組織中SOD、GSH、MDA、8-OHDG的含量及蛋白濃度。
　　 用SPSS17.0軟件對結(jié)果進行統(tǒng)

6、計分析，符合正態(tài)分布，以均值±標準差表示，并用Pearson法分析染毒劑量與兩種代謝產(chǎn)物含量的相關性。
　　 結(jié)果:除了低劑量染毒組檢測不出(+)-anti-BPDE-DNA加合物，高、中劑量染毒組均可檢測出3-OHBaP和(+)-anti-BPDE-DNA加合物。染毒劑量和BaP代謝產(chǎn)生的3-OHBaP、(+)-anti-BPDE-DNA加合物存在顯著正相關(p＜0.O1)。染毒劑量和MDA、8-OHDG存在正相關。染毒后大鼠