左旋咪唑與I2R的放射性受體配基實驗觀察.pdf

1、目的：探討12R是否參與了LMS誘發(fā)炎性脫髓鞘白質(zhì)腦病的病理過程。觀察左旋咪唑(LMS)在體外試驗中能否與正常大鼠腦組織咪唑啉2受體(12R)結合；觀察LMS能否在體內(nèi)試驗中對長期LMS處理大鼠腦內(nèi)的I2R產(chǎn)生影響；并觀察炎性脫髓鞘腦病動物模型(EAE)以及左旋咪唑一完全弗氏佐劑(LMS-CFA)直接致敏并長期LMS處理大鼠腦組織中12R的變化。 方法：(1)實驗一：正常大鼠腦組織I2R競爭結合試驗。該實驗用[3H]2-BFI標

2、記12R，加入BU224測定非特異性結合，LMS采用0.1nM到1mM10個不同的濃度。通過測定其平衡解離常數(shù)(Ki)及50％的放射性配基結合被取代所需的競爭劑濃度(IC50)觀察在正常大鼠腦組織I2R與配基的結合實驗中，LMS對[3H]2-BFI是否能起競爭結合作用，即測定LMS與I2R在體外結合能力；(2)實驗二：LMS長期處理大鼠腦組織12R飽和結合實驗。將大鼠分為LMS處理組和生理鹽水(NS)對照組，每組6只。LMS處理組采用腹

3、腔注射LMS10mg/Kg，每12小時1次，連續(xù)兩周；NS對照組采用腹腔注射NS0.4ml，每12小時1次，連續(xù)兩周。用[3H]2-BFI標記12R，以飽和結合試驗測定兩組大鼠腦組織12R受體密度和親和力的變化；(3)實驗三：LMS-CFA致敏并長期LMS處理及EAE大鼠的腦組織I2R飽和結合實驗。將大鼠分為EAE模型組、LMS致敏組及CFA對照組，每組6只大鼠。EAE模型組通過免疫當天予四足墊皮下注射豚鼠脊髓勻漿(GPSCH)-CFA

4、的方式免疫大鼠，后予腹腔注射NS0.4ml每12小時1次，于發(fā)病高峰期處死；LMS致敏組通過免疫當天予四足墊皮下注射LMS-CFA，后予腹腔注射LMS10mg/Kg每12小時1次，連續(xù)19天；CFA對照組大鼠通過免疫當天予四足墊皮下注射NS-CFA的方式免疫大鼠，后予腹腔注射NS0.4ml每12小時1次，連續(xù)19天；所有大鼠均予免疫0，48小時腹股溝皮下注射百日咳菌苗0.1ml(1×109菌體)。三組大鼠腦組織I2R進行飽和結合試驗，檢

5、測其密度和親和力變化。 結果：(1)正常大鼠競爭結合實驗。LMS能與[3H]-2BFI競爭結合大鼠腦組織12R受體，且具有濃度依賴性。IC50值為1.292x10-5M，Ki值為9.796x10-6M。(2)LMS長期處理大鼠腦組織12R飽和結合實驗。LMS處理組I2R親和力(Kd)和受體密度(Bmax)值分別是7.274±1.929nM和432.7±71.76fmol/mg蛋白；NS對照組腦組織12R的Kd和Bmax值分別是6

6、.262±1.696nM和194.7.0±31.53fmol/mg蛋白。LMS處理大鼠腦組織的12R受體密度明顯上調(diào)(n=6，P＜0.05)，而親和力兩組相比無統(tǒng)計學差異。(3)LMS致敏并長期處理大鼠及EAE大鼠腦組織I2R飽和結合實驗。CFA對照組與LMS致敏組大鼠沒有發(fā)病，EAE組6只大鼠，發(fā)病4只。CFA對照組腦組織12R的Kd和Bmax值分別是3.367±0.94nM和162±22.19fmol/mg蛋白。EAE組大鼠腦組織I

7、2R的Kd和Bmax值分別是5.416±1.153nM和263.0±31.99fmol/mg蛋白；與CFA對照組相比，其受體密度明顯上調(diào)(n=6，P＜0.05)，而親和力明顯下降(n=6，P＜0.01)。LMS處理組腦組織12R的Kd和Bmax值分別是4.916±0.91nM和456.6±46.69fmol/mg蛋白，與CFA對照組相比，其受體密度明顯上調(diào)(n=6，P＜0.01)，而親和力明顯下降(n=6，P＜0.05)。 結論