染料木黃酮對細胞光化學(xué)損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的:探討染料木黃酮對補骨脂素光化學(xué)療法(8-methoxypsoralenplus ultraviolet-A irradiation，PUVA)所致體外培養(yǎng)真皮成纖維細胞光化學(xué)損傷的保護作用，并研究其潛在的作用機制。
　　方法:采用酶消化法分離、培養(yǎng)原代真皮成纖維細胞，傳代并擴增。以其特異性標記物波形蛋白(Vimentin)做免疫熒光鑒定。實驗分三組:正常對照組、光化學(xué)損傷組及染料木黃酮組。運用PUVA聯(lián)合構(gòu)建體外培養(yǎng)真皮成纖

2、維細胞光化學(xué)損傷模型。噻唑藍比色法(MTT法)測定各組細胞增殖活性，確定染料木黃酮的最適光保護作用濃度，并繪制各組細胞連續(xù)10天的生長曲線。光鏡下觀察細胞形態(tài)，酶組織化學(xué)法檢測細胞衰老β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-Gal)的表達。流式細胞術(shù)檢測細胞周期及細胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species，ROS)含量，實時熒光定量PCR檢測細胞基質(zhì)金屬蛋白酶（

3、Matrix metalloproteinases，MMPs）及雌激素受體β(Estrogen receptor-β) mRNA的表達。
　　結(jié)果:酶消化法分離的真皮成纖維細胞經(jīng)特異性標記物鑒定，陽性率達99％以上。在一定濃度范圍內(nèi)，染料木黃酮的光保護作用呈劑量依賴性增強。UVA照射細胞后24 h，光化學(xué)損傷組絕大多數(shù)細胞由分裂表型轉(zhuǎn)化為無分裂活性表型(99.7±0.58)％，與正常對照組(7.7±1.15)％及染料木黃酮組(57

4、.7±3.51)％均有顯著性的差異(P＜0.01);根據(jù)描繪的生長曲線顯示，正常對照組細胞呈現(xiàn)典型的“S”型曲線，光化學(xué)損傷組細胞呈一直線，幾乎無增長，而染料木黃酮組細胞雖有增殖，但在觀察期間未達到生長平臺期;正常對照組、光化學(xué)損傷組及染料木黃酮組SA-β-Gal陽性細胞率分別為(0.67±0.58)％、(96.67±1.53)％、(51.67±2.08)％，各組間具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01); PUVA能阻滯細胞于細胞周期的S期，染

5、料木黃酮則在一定程度上解除該阻滯，使細胞由S期進入G2/M期;光化學(xué)損傷組細胞內(nèi)MMPs mRNA表達及ROS含量均較正常對照組明顯增高，染料木黃酮組則高于正常對照組而低于光化學(xué)損傷組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);染料木黃酮組細胞雌激素受體β(ER-β) mRNA表達較正常對照組及光化學(xué)損傷組明顯增高(P＜0.01)。
　　結(jié)論:適當濃度的染料木黃酮能在一定程度上保護PUVA所致真皮成纖維細胞光化學(xué)損傷作用，表現(xiàn)在細胞增殖