染料木黃酮對(duì)細(xì)胞光化學(xué)損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討染料木黃酮對(duì)補(bǔ)骨脂素光化學(xué)療法(8-methoxypsoralenplus ultraviolet-A irradiation，PUVA)所致體外培養(yǎng)真皮成纖維細(xì)胞光化學(xué)損傷的保護(hù)作用，并研究其潛在的作用機(jī)制。
　　方法:采用酶消化法分離、培養(yǎng)原代真皮成纖維細(xì)胞，傳代并擴(kuò)增。以其特異性標(biāo)記物波形蛋白(Vimentin)做免疫熒光鑒定。實(shí)驗(yàn)分三組:正常對(duì)照組、光化學(xué)損傷組及染料木黃酮組。運(yùn)用PUVA聯(lián)合構(gòu)建體外培養(yǎng)真皮成纖

2、維細(xì)胞光化學(xué)損傷模型。噻唑藍(lán)比色法(MTT法)測(cè)定各組細(xì)胞增殖活性，確定染料木黃酮的最適光保護(hù)作用濃度，并繪制各組細(xì)胞連續(xù)10天的生長(zhǎng)曲線。光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，酶組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞衰老β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-Gal)的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species，ROS)含量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶（

3、Matrix metalloproteinases，MMPs）及雌激素受體β(Estrogen receptor-β) mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:酶消化法分離的真皮成纖維細(xì)胞經(jīng)特異性標(biāo)記物鑒定，陽(yáng)性率達(dá)99％以上。在一定濃度范圍內(nèi)，染料木黃酮的光保護(hù)作用呈劑量依賴性增強(qiáng)。UVA照射細(xì)胞后24 h，光化學(xué)損傷組絕大多數(shù)細(xì)胞由分裂表型轉(zhuǎn)化為無(wú)分裂活性表型(99.7±0.58)％，與正常對(duì)照組(7.7±1.15)％及染料木黃酮組(57

4、.7±3.51)％均有顯著性的差異(P＜0.01);根據(jù)描繪的生長(zhǎng)曲線顯示，正常對(duì)照組細(xì)胞呈現(xiàn)典型的“S”型曲線，光化學(xué)損傷組細(xì)胞呈一直線，幾乎無(wú)增長(zhǎng)，而染料木黃酮組細(xì)胞雖有增殖，但在觀察期間未達(dá)到生長(zhǎng)平臺(tái)期;正常對(duì)照組、光化學(xué)損傷組及染料木黃酮組SA-β-Gal陽(yáng)性細(xì)胞率分別為(0.67±0.58)％、(96.67±1.53)％、(51.67±2.08)％，各組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01); PUVA能阻滯細(xì)胞于細(xì)胞周期的S期，染

5、料木黃酮?jiǎng)t在一定程度上解除該阻滯，使細(xì)胞由S期進(jìn)入G2/M期;光化學(xué)損傷組細(xì)胞內(nèi)MMPs mRNA表達(dá)及ROS含量均較正常對(duì)照組明顯增高，染料木黃酮組則高于正常對(duì)照組而低于光化學(xué)損傷組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);染料木黃酮組細(xì)胞雌激素受體β(ER-β) mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組及光化學(xué)損傷組明顯增高(P＜0.01)。
　　結(jié)論:適當(dāng)濃度的染料木黃酮能在一定程度上保護(hù)PUVA所致真皮成纖維細(xì)胞光化學(xué)損傷作用，表現(xiàn)在細(xì)胞增殖