脾淋巴細(xì)胞β-,2-腎上腺素受體激活參與佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠抗體的產(chǎn)生及木瓜苷對(duì)其的影響.pdf

1、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性、炎性、系統(tǒng)性的自身免疫性疾病，病理表現(xiàn)多種多樣。在RA的發(fā)病過(guò)程中不僅有T細(xì)胞參與，同時(shí)伴有B細(xì)胞高度活化，患者血清中可出現(xiàn)多種自身抗體，導(dǎo)致組織和器官的損傷。RA患者體內(nèi)存在的自身抗體如抗角蛋白抗體(antikeratin antibody AKA)，類(lèi)風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF)等是自身免疫疾病的重要標(biāo)志。這些特異性抗體與其相應(yīng)的抗原形

2、成抗原抗體復(fù)合物，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，觸發(fā)一系列的自身免疫反應(yīng)。日益增多的研究表明：自身抗體的產(chǎn)生在RA的病程中發(fā)揮著重要的作用。由于RA的病因和發(fā)病機(jī)制仍不甚明確，目前還沒(méi)有令人滿(mǎn)意的療法。 木瓜苷(glucosides of chaenomeles speciosa，GCS)是從宣木瓜中提取的有效部位。本課題組前期研究表明，GCS具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用，對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthrJtis，AA)和膠原性關(guān)節(jié)炎

3、(collagen-induced arthitis，CLA)均有不同程度的預(yù)防和治療作用。GCS對(duì)大鼠關(guān)節(jié)炎的治療作用與其調(diào)節(jié)大鼠滑膜細(xì)胞和腸淋巴細(xì)胞的鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白(Guanine nucleotide-binding proteins，簡(jiǎn)稱(chēng)G蛋白)偶聯(lián)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。脾臟是機(jī)體最大的外周淋巴器官，其中B細(xì)胞約占60％。B細(xì)胞在抗原刺激下轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，繼而分泌特異性免疫球蛋白，同時(shí)發(fā)揮抗原提呈作用，是體液免疫的基礎(chǔ)。β2-腎上腺素受

4、體(β2-adrenergic receptor，β2AR)是一類(lèi)在免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮重要作用的G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptors，GPCRs)，其異常表達(dá)影響免疫細(xì)胞的功能，參與疾病的發(fā)生和發(fā)展。本研究采用大鼠AA模型，觀察GCS對(duì)AA大鼠繼發(fā)側(cè)足爪腫脹度和脾臟病理形態(tài)學(xué)的影響，首次研究GCS對(duì)AA大鼠血清抗體水平的影響及機(jī)制；以脾淋巴細(xì)胞(spleenlymphocytes，SLC)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，首

5、次探討GCS對(duì)AA大鼠SLC cAMP水平和β2AR表達(dá)的影響，分析SLCβ2AR-G蛋白-cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在GCS下調(diào)AA大鼠抗體產(chǎn)生中的作用。 目的： 實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察GCS對(duì)AA大鼠足爪腫脹、脾臟病理形態(tài)學(xué)改變的改善作用，闡述GCS對(duì)AA大鼠脾臟功能的影響；通過(guò)檢測(cè)大鼠血清抗體水平SLC cAMP水平和132AR表達(dá)情況，闡述SLC β2AR-G蛋白-cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在GCS下調(diào)AA大鼠抗體產(chǎn)生中的作用。 方法

6、： 大鼠足趾皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(Freund'S completed adjuvant，F(xiàn)CA)誘發(fā)大鼠AA模型；以GCS(30、60、120 mg·kg-1)治療給品藥(ig，d17-d24)，雷公藤多苷(GTW，40 mg.kg-1)作為陽(yáng)性對(duì)照。足容積法測(cè)量繼發(fā)側(cè)足腫脹、進(jìn)行多發(fā)性關(guān)節(jié)評(píng)分并記錄脾臟指數(shù)的變化；光學(xué)顯微鏡觀察脾臟病理學(xué)變化；聚乙二醇(PEG)6000沉淀法檢測(cè)血清循環(huán)免疫復(fù)合物(circulating i

7、mmune complexes，CIC)：酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)血清中抗Ⅱ型膠原抗體(anti-CIIantibody)水平和抗結(jié)核桿菌抗體(anti-TB antibody)水平；放射性免疫法測(cè)定脾細(xì)胞產(chǎn)生的cAMP水平；免疫組化法動(dòng)態(tài)檢測(cè)脾臟β2AR蛋白的表達(dá)；Western blot法檢測(cè)β2AR蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.GCS緩解A

8、A大鼠關(guān)節(jié)腫脹和脾臟炎癥與其下調(diào)血清抗體水平相關(guān)GCS(30、60、120mg.kg-1)治療給藥(ig，d17-d24)可不同程度減輕AA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度，改善AA大鼠脾臟炎癥和病理變化，其中GCS(120 mg·kg-1，ig，d17一d24)改善最為顯著；GCS(60、120 mg·kg-1)可明顯降低脾臟指數(shù)。 AA大鼠血清循環(huán)免疫復(fù)合物(circulating immune complexes，CIC)水平、血清中抗Ⅱ型

9、膠原抗體(anti-CⅡ antibody)和抗結(jié)核桿菌抗體(anti-TB antibody)水平顯著升高，GCS(60、120 mg·kg-l,ig，d17-d24)體內(nèi)給藥可明顯降低血清中升高的抗體水平。相關(guān)性分析顯示，GCS緩解AA大鼠關(guān)節(jié)腫脹與其降低血清抗體水平密切相關(guān)。 2.GCS下調(diào)血清抗體水平與其降低SLC胞內(nèi)升高的cAMP水平相關(guān)AA大鼠SLC產(chǎn)生的cAMP水平明顯高于正常大鼠，GCS(60、120mg·kg-

10、1)治療給藥(ig，d17一d24)可進(jìn)一步降低AA大鼠SLc胞內(nèi)升高的cAMP水平，相關(guān)性分析顯示，GCS下調(diào)血清抗體水平與其降低SLC胞內(nèi)升高的cAMP水平密切相關(guān)，提示GCS調(diào)節(jié)AA大鼠SLC胞cAMP水平是其下調(diào)AA大鼠血清抗體水平，發(fā)揮治療作用的特點(diǎn)之一。 3.AA大鼠SLCβ2AR的表達(dá)情況及GCS的調(diào)節(jié)作用采用免疫組化和Western blot法檢測(cè)SLC的β2AR蛋白表達(dá)水平。AA大鼠致敏后，SLC中β2AR表達(dá)

11、水平顯著降低，提示SLC β2AR參與AA的發(fā)病過(guò)程。GCS(60、120mg.kg-1,ig，d17一d24)能明顯上調(diào)β2AR的表達(dá)。這一結(jié)果提示GCS通過(guò)調(diào)節(jié)SLC β2AR-G蛋白-cAMP的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下調(diào)AA大鼠抗體產(chǎn)生。 結(jié)論： 1.GCS對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)腫脹和脾臟病理學(xué)形態(tài)的改變具有明顯的改善作用；GCS能顯著下調(diào)血清抗體水平。 2.降低AA大鼠SLC升高的cAMP水平是GCS下調(diào)血清抗體水平的重要